Mesna pepton supa mesno-peptonski bujon
(Izvor: „Mikrobiologija: rečnik pojmova“, Firsov N.N., M: Drofa, 2006)
Mesna pepton supa(MPB) je glavni tekući hranljivi medij koji se koristi za uzgoj hemoorganotrofnih bakterija. Priprema se na bazi mesne vode ili 0,5-1% vodenog rastvora mesnog ekstrakta, uz dodavanje 0,5-1% peptona i 0,5% natrijum hlorida. Postavite pH na 7,4 -7,6. Sterilizirati autoklavom na 120°C 15-30 minuta. Cm. Bakteriološke hranljive podloge.
(Izvor: Rječnik mikrobioloških pojmova)
Pogledajte šta je "mesno-peptonski bujon" u drugim rječnicima:
- (MPB) tečni hranljivi medij za uzgoj mikroorganizama, koji se sastoji od mesne vode i peptona (1 2%); služi kao osnova za mnoge druge tečne kulture... Veliki medicinski rječnik
Mesna juha, hranljivi medij koji se koristi za uzgoj mikroorganizama uključenih u razgradnju proteina. Ovisno o aditivima razlikuju se npr. glicerin B., nitrat B., laktoza B., najčešći je...... Mikrobiološki rječnik
NUTRIENTS- HRANLJIVA MEDIJA, veštačka podloga jednog ili drugog sastava, namenjena za uzgoj mikroba i protozoa u laboratorijskim uslovima. Prvi put ih je za izolaciju određenih vrsta bakterija uveo R. Koch 1881. godine, koji je stvorio ... ... Velika medicinska enciklopedija
Supstrati koji se sastoje od komponenti koje pružaju potrebne uslove za uzgoj mikroorganizama ili akumulaciju njihovih metaboličkih proizvoda. Hranljivi mediji se razlikuju po namjeni, konzistenciji i sastavu. Prema njihovoj namjeni...... Medicinska enciklopedija
Hranljivi medij je tvar ili mješavina tvari koja se koristi za uzgoj makro i mikroorganizama. Dostupne su mnoge standardne biološke podloge za kulturu. Sadržaj 1 Zahtjevi za okruženja 2 Klasifikacija ... Wikipedia
Pod imenom bakterija u nauci su poznati najmanji organizmi mikroskopske veličine koji pripadaju biljnom carstvu. Po svojoj organizaciji i svojim morfološkim karakteristikama, B. su najbliže tzv. cijan ili ... ... Enciklopedijski rječnik F.A. Brockhaus i I.A. Efron
Ag antigen AE je antitoksična ili antigenska jedinica antibakterijska. antibakterijsko Ab antitijelo ATP adenozin trifosforna kiselina bakterija. bakterijski bakteriol bakteriološki bakterioskop. bakterioskopska BAS baktericidna aktivnost ... ... Mikrobiološki rječnik
Mesni pepton agar(MPA) je najčešći univerzalni hranljivi medij u mikrobiološkim istraživanjima.
Compound
- enzimski pepton
- ekstrakt mesa (1:2)
- natrijum hlorida
- glukoze
Opis
Lijek je gusta žuta hranjiva podloga.
Dostupan u obliku guste hranjive podloge od 300 ml u staklenim bocama, otčepljenim čepovima i zamotanim aluminijskim čepovima.
Svrha
Koristi se za uzgoj i proučavanje kulturnih svojstava različitih mikroorganizama.
Moguće je koristiti lijek kao hranljivu bazu za pripremu različitih hranjivih podloga za specifične namjene.
Skladištenje
Rok trajanja: 2 godine. Medij se čuva hermetički zatvoren na temperaturi od 2 do 25°C na mjestima zaštićenim od direktne sunčeve svjetlosti.
Priprema
U 1 litar mesno-peptonske čorbe dodati 15-20 g sitno isjeckanog agar-agara. Podloga se zagreva dok se agar ne otopi (talište mu je 100°C, tačka očvršćavanja -40°C), podloga je blago alkalna sa 20% rastvorom Na2CO3 i sipa se u epruvete kroz levak (ali 10 ml za sipanje u čaše - agar kolona i po 5 ml za dobijanje kosog, kosog agara). Kada sipate agar, morate paziti da su rubovi epruvete suhi, inače će se čepovi zalijepiti za staklo. Epruvete sa medijumom se sterilišu u autoklavu na 120°C 20 minuta.
Postoji još jedna verzija podloge - mesno-peptonski želatin (MPG), gdje se umjesto agara koristi želatin za učvršćivanje podloge. U 1 litar mesne pepton čorbe dodati 100-150 g želatine. Tačka topljenja zavisi od procenta u medijumu. 10% želatina se topi na 24°C, 15% na 25°C. Ljeti se podloga priprema dodavanjem 15% želatine. Nakon otapanja želatine, uz pažljivo zagrevanje, u medijumu se uspostavlja blago alkalna reakcija (kao za MPB i MPA), kuvana 5 minuta, zatim ohlađena na 40-50°C. U isto vreme umutite belanca sa malo vode, sipajte u ohlađenu želatinsku podlogu, dobro promućkajte i ponovo zagrejte. Podloga postaje prozirna nakon precipitacije proteina. Filtrira se kroz vrući lijevak, sipa se u epruvete i sterilizira u Koch kotlu sa tekućom parom, zagrijavajući medij po 30 minuta svaka 24 sata tri puta.
stranica 1
strana 2
strana 3
strana 4
stranica 5
stranica 6
strana 7
strana 8
strana 9
strana 10
strana 11
strana 12
strana 13
strana 14
strana 15
strana 16
strana 17
strana 18
Cijena 5 kopejki.
Službena publikacija
DRŽAVNI KOMITET ZA STANDARDE SAVETA MINISTARA SSSR-a
RAZVIO Sve-savezni državni naučni i kontrolni institut za veterinarske lijekove
Direktor Boyko A. A.
Voditelj teme: Prostyakov A.P.
Izvođači teme: Agapova Z. A., Tsygankova S. I., Golikova G. A.
UVEDENO od strane Ministarstva poljoprivrede SSSR-a
Član odbora Tretyakov A.D.
PRIPREMLJENO ZA ODOBRENJE od strane Svesaveznog naučnoistraživačkog instituta za standardizaciju (VNIIS)
Direktor Glichev A.V.
ODOBREN I STUPAN NA SNAGU Rezolucijom Državnog komiteta za standarde Vijeća ministara SSSR-a od 9. aprila 1975. br. 899
u odmjernoj tikvici dovedite volumen do 1 litre, filtrirajte kroz papirni filter i čuvajte u tamnoj boci sa samljevenim čepom na tamnom mjestu. Reagens D treba biti slamnato žute boje bez zelene nijanse, tada se određuje koncentracija kiseline u reagensu. Da bi se to učinilo, pripremljeni reagens se razblaži destilovanom vodom 1:10 (1 ml reagensa i 9 ml vode) i titrira sa 0,1 N. rastvor natrijum hidroksida za fenolftalein (3-4 kapi). Kiselost se izračunava tako što se broj mililitara podijeli sa 0,1 N. alkalija koja se koristi za titraciju 1 ml reagensa D na 10. Reagens D ima kiselost od 1,6-2,3 N.
Priprema reagensa E
Reagens E je reagens D razrijeđen na 1 N. rješenje. Na primjer, ako je reagens D 2,3 N. rastvor kiseline, a zatim pripremiti 1 N. rastvor E potrebno je uzeti 10 ml reagensa D i 13 ml destilovane vode
Konstrukcija kalibracionog grafikona za određivanje proteina
Priprema se serija rastvora sa određenim sadržajem proteina opadajuće koncentracije od 0,10 do 0,01%, sa kojima se vrši reakcija boje prema tački 3.8.3. Za pripremu otopina možete koristiti albumin, miozin i prirodni serum. Sadržaj proteina u rastvorima se određuje prema Kjeldahlu. Intenzitet boje se mjeri na fotoelektrokolorimetru u odnosu na vodu. Optička gustoća kontrole reagensa oduzima se od optičke gustoće proteinskih otopina i rezultujuća vrijednost se prikazuje duž ordinatne ose. Osa apscise prikazuje koncentraciju proteina u otopini (u postocima ili miligramima).
Razrjeđenje ispitnog uzorka za postavljanje reakcije u boji se bira tako da glavni broj mjerenja za vrijednost optičke gustoće bude u rasponu od 0,2-0,8, gdje je tačnost mjerenja najveća.
3.8 3. Test performansi
U epruvetu se ulije 1 ml mesno-peptonske čorbe razrijeđene 1:10, doda se 5 ml reagensa C, promiješa se i nakon 10 minuta doda se 0,5 ml reagensa E reagense, za koje se umjesto mesno-peptonske juhe uzima 1 ml destilovane vode i dodaju se isti reagensi kao u epruveti sa mesno-peptonskom juhom. Smjesa se dobro promiješa i stavi na tamno mjesto 30-40 minuta.
Intenzitet boje se mjeri na fotoelektrokolorimetru sa crvenim filterom (630-640 nm) prema vodi u kivetama od 5 mm. Od vrijednosti optičke gustoće testnog uzorka oduzima se vrijednost optičke gustoće kontrole za reagense. Na osnovu dobijenih vrijednosti optičke gustoće otopina, kalibracijskim grafom se određuje sadržaj bijele boje.
GOST 20730-75ka u uzorcima. Prilikom izračunavanja sadržaja proteina u uzorku, faktor razrjeđenja se uzima u obzir prije izvođenja reakcije boje.
Kao konačni rezultat testa uzima se aritmetička sredina rezultata dva paralelna određivanja. Dozvoljene razlike između rezultata paralelnih određivanja ne bi trebalo da prelaze ±0,05%.
3.9. Određivanje sadržaja natrijum hlorida
3.9.1. Oprema, materijali i reagensi Za ispitivanje se koriste: analitičke vage;
grijaći element (plamenik, štednjak); pipete prema GOST 1770-64; birete prema GOST 1770-64; laboratorijske čaše prema GOST 10394-63; feri amonijum alum prema GOST 4205-68, zasićeni rastvor;
3.9.2. Sprovođenje testa
Mesno-peptonski bujon u količini od 20 ml stavi se u čašu i doda se 1 ml koncentrovane azotne kiseline i 10 ml 0,1 N. rastvor srebrnog nitrata.
Dobivena smjesa se zagrijava dok ne počne ključati i brzo se hladi uranjanjem stakla u posudu s vodom sobne temperature. Nakon hlađenja, u smjesu se dodaje 2 ml zasićenog rastvora feroamonijum aluma i titrira se sa 0,1 N. rastvor kalijum tiocijanata (ili amonijum tiocijanata) dok se ne pojavi žućkasto-ružičasta boja.
3.9.3. Obrada rezultata
(U k -U g K x) 0,005844-100
gdje je V iznos od 0,1 n. rastvor srebrnog nitrata, uzet u čašu sa uzorkom, ml;
K - faktor korekcije titra 0,1 n. rastvor srebrnog nitrata;
Vi - iznos 0,1 n. rastvor kalijum tiocijanata (ili amonijum tiocijanata), utrošen za titraciju ispitnog uzorka, ml;
K\ - faktor korekcije titra 0,1 n. rastvor kalijum tiocijanata (ili amenijum tiocijanata);
0,005844 - količina natrijum hlorida koja odgovara 1 ml 0,1 N. rastvor srebrnog nitrata;
V 2 - količina mesno-peptonske čorbe uzete za analizu, ml.
Kao konačni rezultat testa uzima se aritmetička sredina rezultata dva paralelna određivanja. Dozvoljene razlike između rezultata paralelnih određivanja ne bi trebalo da prelaze ±0,01%.
3.10. Određivanje koncentracije vodikovih jona (pH)
3.10.1. Oprema i materijali
Za izvođenje testa koristite: pH metar;
Stakleni lijevci;
Čepovi od pamučne gaze;
papirni filteri;
GOST 13805-68 GOST 17206-71.
3.11.2. Priprema za test
Mesno-peptonski bujon (MPB), mesno-peptonski agar (MPA) i mesno-peptonsko-jetreni bujon (MPLP) pod uljem (Kip-Tar ots-qi medij) pripremaju se prema važećoj recepturi. Mediji se sipaju u boce od 8-10 ml, zatvaraju čepovima od pamučne gaze i pergamentnim čepovima i sterilišu u autoklavu 30 minuta na 1,5 kgf/cm 2 .
3.11.3. Sprovođenje testa
Mesno-peptonski bujon (cijela serija) drži se u reaktoru ili u bocama tri dana na sobnoj temperaturi.
Sterilni uzorak mesno-peptonske čorbe pakuje se od 100 ml u četiri boce od 200 ml. Zatim se mesno-peptonski bujon inokulira u epruvete sa MPB, MPA i MPPB. Inokulacije se vrše u 6-8 epruveta sa svakom podlogom. Inokulacija se vrši tako što se u svaku epruvetu doda 0,2 ml ispitivane mesno-peptonske juhe. Epruvete i boce se drže tri dana u termostatu na temperaturi od 37-38°C. Mediji u epruvetama i mesno-peptonski bujon u bočicama moraju ostati sterilni.
3.11.4. Obrada rezultata
Ukoliko dođe do rasta mikroflore u reaktoru ili bocama, serija mesno-peptonskog bujona se odbija. Ukoliko dođe do rasta mikroflore u svim bocama i epruvetama, odbacuje se i serija mesno-peptonskog bujona.
Ukoliko dođe do rasta mikroflore u jednoj bočici ili u jednoj ili dvije epruvete, kontrola sterilnosti se ponavlja na duplo većem broju bočica i epruveta. Ako mikroflora ponovo raste, serija mesno-peptonskog bujona se odbija.
3.12. Određivanje sposobnosti da se podrži rast mikroba
3.12.1. Oprema, materijali i reagensi Za ispitivanje se koriste: tehničke vage;
termostat;
autoklav;
Stakleni lijevci;
Čepovi od pamučne gaze;
papirni filteri;
suvi enzimski pepton prema GOST 13805-68; mikrobiološki agar prema GOST 17206-71.
3.12.2. Priprema za test
Pripremite prema važećem receptu na osnovu probnog mesno-peptonskog bujona mesno-pepton agar, dodajući 2% mikrobiološkog agara u čorbu, i podesite pH podloge na 7,4.
Ispitni mesno-peptonski bujon i pripremljeni mesno-peptonski agar se sipaju u 8-10 ml u epruvete, zatvaraju čepovima od pamučne gaze i pergamentnim čepovima i sterilišu u autoklavu 30 minuta na 1,5 kgf/cm 2 .
3.12.3. Sprovođenje testa
Sterilni mesno-peptonski bujon i mesno-peptonski agar inokuliraju se dnevnim kulturama: Staphylococcus aureus “Lassmanov”, Esherichia coli, soj 675, Streptococcus faccalis, soj 6783, dobijen od Državnog istraživačkog instituta za standardizaciju i kontrolu medicinskih preparata. L. A. Tarasevich. Svaka kultura se inokulira pomoću Pasteurove petlje u tri epruvete sa MPB i tri epruvete sa MPA. Inkubacija se vrši 24 sata u termostatu na 37-38°C.
Rast useva treba da bude tipičan i obilan.
3.12.4. Obrada rezultata
Tipičan rast dnevnih kultura određuje se vizualno i pod mikroskopom.
Intenzitet rasta u MPA se procenjuje vizuelno, u MPB - vizuelno i na fotoelektričnom kolorimetru na talasnoj dužini 620-640 nm u kivetama radne dužine 5 mm.
4. PAKOVANJE, PAKOVANJE, OZNAČAVANJE, TRANSPORT I SKLADIŠTENJE
4.1. Mesno-peptonski bujon se sterilno pakuje u staklene boce (cilindre) zapremine 10±0,5 i 20±1 litara. Dozvoljena je manja ambalaža - boce kapaciteta 200 i 500 ml.
4.2. Boce su zatvorene sterilnim gumenim čepovima u skladu sa GOST 7852-65, koji su na vrhu vezani pergamentnim papirom. Boce su zatvorene gumenim čepovima i zamotane aluminijskim čepovima.
4.3. Papirne naljepnice su pričvršćene na boce i bočice koje označavaju:
naziv lijeka;
količina lijeka u l;
brojevi serija lijekova;
datumi proizvodnje;
datum isteka;
uslovi skladištenja;
simboli ovog standarda.
4.4. Mesno-peptonski bujon se čuva u reaktoru ili u bocama u čistoj, suvoj i tamnoj prostoriji na temperaturi od 4-10°C.
4.5. Mesno-peptonski bujon se transportuje svim transportnim sredstvima uz poštovanje uslova skladištenja navedenih u tački 4.4. Dozvoljen je transport na višoj temperaturi, ali ne višoj od 18°C, a rok transporta ne bi trebao biti duži od pet dana.
GOST 20730-754.6. Rok trajanja mesno-peptonske juhe je 6 mjeseci od datuma proizvodnje. Nakon navedenog roka, mesno-peptonski bujon se ispituje i, ako su ispunjeni zahtjevi utvrđeni ovim standardom, rok trajanja se može produžiti za još 3 mjeseca.
Urednik Ya E. Shestakova Tehnički urednik V. Yu Smirnova Korektor I. L. Khinits
Isporučeno na nasip 18 04 75 Sub. u rerni 25 05 75 1,0 p.l. streljana 6000 Cijena 5 kopejki.
Izdavačka kuća standarda. Moskva, D-22, Novopresnenska ulica, 3 Tip. "Moskovski štampar". Moskva, Ljalin per.. 6. Zak. 683
Klauzule 3.4.1, 35.1, 3.6 1, 3.7.1, 38 1, 3.9 1, 3.11.1, 3 12 1. Zamijenite referencu GOST 1770-64 sa GOST 1770-74.
Punmy 3 1 I, 3.5.1, 3.9.1, 3 10.1. Zamijenite vezu: GOST 10394-63 sa GOST 25336_82
Tačke 3.4.1, 3.5.1, 3.6.1, 3.8.1. Zamijenite vezu: GOST 4328-66 sa GOST 4328-77.
Tačke 3.6.1, 3.8.1, 3.11.1, 3.12.1. Zamijenite vezu: GOST 10515-75 sa GOST 25336_82
Tačka 3.6.1. Izbrisati riječi: "papirni filteri", "stakleni lijevci prema GOST 8613-64";
dodati pasus: "stolne centrifuge tipa OPN-8-14.2."
Tačka 3.6.3. Treći paragraf. Zamijenite riječi: "Nakon 2 minute, smjesa se filtrira kroz papirne filtere" sa "Nakon 2 minute, smjesa se centrifugira 10 minuta pri brzini rotacije 3000 -4000-1."
Tačka 3.9.2. Drugi pasus treba navesti u novom izdanju: „U čašu se stavi 2 cm 3 mesno-peptonske čorbe, doda se 20 cm* vode, 1 cm 3 koncentrovane azotne kiseline i 10 cm 3 0,1 N. rastvor srebrnog nitrata."
Tačka 3.9.3. Navedite formulu u novom izdanju:
(VK-V X K X) 0,005844 100 X 3 - Vt
Tačke 3.11.1, 3.12.1. Zamijenite reference: GOST 13805-68 sa GOST 13805-76, GOST 17206-71 sa GOST 17206-84.
Odjeljak 4. Ime. Izbrišite riječ: “pakovanje”.
(IUS br. 11 iz 1989.)
UDK 576.8.093.1(083.74) Grupa P35
DRŽAVNI STANDARD SSSR-a
NUTRIENT MEDIA. MESO-PEPTON JUHA (ZA VETERINARSKE SVRHE)
Juha od tona mesa paprike (za veterinu)
Rezolucijom Državnog komiteta za standarde Vijeća ministara SSSR-a od 9. aprila 1975. br. 899 utvrđen je rok važenja
od 01.01.1976. do 01.01.1981
Nepoštivanje standarda je kažnjivo po zakonu
Ovaj standard se odnosi na mesno-peptonsku juhu, koja je hranljivi rastvor namenjen za uzgoj mikroorganizama.
1. TEHNIČKI ZAHTJEVI
1.1. Mesno-peptonski bujon mora biti proizveden u skladu sa važećim pravilima za tehnološki proces, odobrenim na propisan način.
1.2. Mesno-peptonski bujon u pogledu fizičko-hemijskih, biohemijskih i bioloških pokazatelja mora odgovarati zahtjevima i standardima navedenim u tabeli. 1.
Tabela I
Nastavak
Karakteristike i standardi
Nazivi indikatora
Sterilnost
2,7 3,0-3,4 0,5 0,5 7,2-7,6
Setva na hranljive podloge ne bi trebalo da izazove rast mikroflore tri dana u termostatu na 37-38°C
Sposobnost podržavanja mikrobnog rasta, optička gustoća, ništa manje.
Staphylococcus aureus "Lassmanov"
Escherichia co I soj 675
Streptococcus faccalis soj 6783
2. PRAVILA PRIHVAĆANJA
2.1. Mesno-peptonski bujon se daje i uzima u serijama.
2.2. Svaku seriju mesno-peptonskog bujona u preduzećima biološke industrije Ministarstva poljoprivrede SSSR-a mora prihvatiti državni kontrolor Svesaveznog državnog naučno-kontrolnog instituta za veterinarske preparate Ministarstva poljoprivrede SSSR-a.
2.3. Pod serijom se podrazumijeva svaka količina mesno-peptonskog bujona proizvedena u jednom tehnološkom ciklusu, u jednom kontejneru (reaktoru) i dokumentovana u jednom dokumentu o kvaliteti.
2.4. Za provjeru kvalitete lijeka uzima se 2 litre iz svake serije mesno-peptonske juhe veće od 50 litara, a 0,6 litara za zapreminu manju od 50 litara.
Ako je cijela serija mesno-peptonskog bujona pakirana u boce, napravite uzorak u količini od jedne boce. Ako se mesno-peptonski bujon pakuje u boce, napravite izbor tolikog broja boca da zapremina mesno-peptonske čorbe u odabranim bocama odgovara gornjoj normi koja se utvrđuje u zavisnosti od ukupne zapremine serije. mesno-peptonskog bujona.
2.5. Ako se dobiju nezadovoljavajući rezultati testa za barem jedan od indikatora, serija mesnih peptona
smatra se da bujon nije u skladu sa zahtjevima ovog standarda.
2.6. Kontrolno ispitivanje uzoraka na zahtjev potrošača provodi Svesavezni državni naučni i kontrolni institut za veterinarske lijekove Ministarstva poljoprivrede SSSR-a.
3. METODE ISPITIVANJA
3.1. Metode uzorkovanja
3.1.1. Uzorak mesno-peptonske čorbe u količini od 2 ili 0,6 litara (u zavisnosti od zapremine šarže leka) uzima se iz reaktora ili boce na sterilan način.
Uzorak od 2 litre pakuje se u 10 boca od po 200 ml. Pet bočica se koristi za analizu, a pet je ostavljeno u arhivi državnog kontrolora.
Uzorak uzet iz šarže mesno-peptonske čorbe zapremine manje od 50 litara ne ostavlja se u arhivi.
3.2. Izgled, boja, prisustvo mehaničkih nečistoća, buđi, pahuljica i taloga utvrđuje se gledanjem boca i boca sa mesno-peptonskim bujonom u propuštenom svetlu, za šta se boce mućkaju, okreću čepovi nadole, a flaše se ljuljaju.
3.3. U uzorku se organoleptički određuje miris mesno-peptonske čorbe
3.4. Određivanje sadržaja ukupnog dušika
3.4.1. Oprema i reagensi
Za izvođenje testa koriste se: analitičke vage;
Kjeldahlova tikvica kapaciteta 50-100 ml prema GOST 10394-63; mikro-Kjeltzal aparat; grijaći element (šporet, plamenik); pipete za 1, 2, 5 ml prema GOST 1770-64; birete prema GOST 1770-64; destilovana voda prema GOST 6709-72; sumporna kiselina prema GOST 4204-66, koncentrirana i 0,1 N. rješenje;
Za konačni rezultat testa uzima se razlika između aritmetičkih sredina dva paralelna određivanja u eksperimentalnom i kontrolnom uzorku. Dozvoljene razlike između rezultata dva paralelna određivanja ne bi trebalo da prelaze ±0,5%.
3.5. Određivanje sadržaja dušika u amino grupama aminokiselina i nižih peptida
3.5.1. Oprema, materijali i reagensi Za izvođenje testa koristite: pH metar;
3.5.2. Priprema za test
Neposredno prije analize priprema se smjesa formola. Da biste to učinili, dodajte 1 ml 1% otopine fenolftaleina i 0,1 N u 50 ml formalina. Otopinom natrijum hidroksida dovedite smjesu do blago ružičaste boje.
3.5.3. Sprovođenje testa
Dodajte 18 ml destilovane vode u 2 ml mesno-peptonske juhe i dodajte 0,1 N. rastvor natrijum hidroksida pH smeše na 7,0. Zatim dodati 2 ml smjese formola i uz stalno miješanje titrirati potenciometrijski sa 0,1 N. rastvor natrijum hidroksida do pH 9,2.
Istovremeno se provodi kontrolni eksperiment na reagensima, za koji se umjesto 2 ml mesno-peptonske juhe uzima 2 ml destilovane vode.
3.5.4. Obrada rezultata
v (V-V\) * K 0,0014,100
gdje je V iznos od 0,1 n. rastvor natrijum hidroksida koji se koristi za titraciju ispitnog uzorka, ml;
Vj - količina 0,1 n. rastvor natrijum hidroksida utrošen za titraciju u kontrolnom eksperimentu, ml;
K - faktor korekcije titra 0,1 n. rastvor natrijum hidroksida;
0,0014 - količina dušika koja odgovara 1 ml 0,1 N. rastvor natrijum hidroksida, g;
2 - količina mesno-peptonske čorbe uzete za analizu, ml.
GOST 20730-75Kao konačni rezultat testa uzima se aritmetička sredina rezultata dva paralelna određivanja. Dozvoljene razlike između rezultata paralelnih određivanja ne bi trebalo da prelaze ±0,2%.
3.6.3. Sprovođenje testa
U epruvetu se sipa 10 ml mesno-peptonske juhe razblažene 1:10, doda se 1 ml 10% rastvora natrijum hidroksida i 2% rastvora bakar sulfata. Smjesa se dobro promućka nakon dodavanja svakog reagensa.
Istovremeno se provodi kontrolni eksperiment na reagensima, za koji se umjesto 10 ml razrijeđene mesno-peptonske juhe uzima 10 ml destilovane vode.
Nakon 2 minute, smjesa se filtrira kroz papirne filtere. Intenzitet boje se mjeri pomoću fotoelektrokolorimetra na talasnoj dužini 540-560 nm ili spektrofotometra na 540 nm u kivetama radne dužine 10 mm.
3.6.4. Obrada rezultata
Koncentracija pravog peptona u mesno-peptonskom bujonu se određuje pomoću kalibracione krivulje.
Optička gustina (E) mesno-peptonskog bujona jednaka je razlici optičkih gustina u eksperimentu sa ispitnim uzorkom i u
kontrolni eksperiment. Koncentracija pravog peptona dobijena iz grafikona množi se sa 10 (tj. razblaženjem mesnog peptona juhe).
Kao konačni rezultat testa uzima se aritmetička sredina rezultata dva paralelna određivanja. Dozvoljene razlike između rezultata paralelnih određivanja ne bi trebalo da prelaze ±5%.
3.7. Određivanje sadržaja suve materije
3.7.1. Oprema
Za izvođenje testa koristite:
analitičke vage;
laboratorijski ormar za sušenje prema GOST 7365-55;
čaše za vaganje (rasute količine) prema GOST 7148-70;
3.7.2. Sprovođenje testa
Boca za vaganje, prethodno osušena do konstantne težine, vaga se s greškom od ne više od 0,0002 g mesno-peptonske čorbe u količini od 1,0-1,2 g temperature 100-105°C do konstantne mase. Sušenje se nastavlja sve dok razlika između dva naredna vaganja ne bude veća od 0,0002 g.
Bilješka. Povećanje mase tokom jednog od vaganja tokom procesa sušenja se ne uzima u obzir u proračunu.
3.7.3. Obrada rezultata
ug _ (t 2 - t) 100
gdje je m masa prazne boce sa poklopcem, g;
W\ - težina boce sa poklopcem i sa mesno-peptonskom čorbom prije sušenja, g;
1% rastvor; bakar sulfat
Reagens C se priprema neposredno pre određivanja mešanjem 50 delova reagensa A i 1 dela reagensa B. Priprema reagensa D
Reagens D (Folinov reagens) priprema se u vatrostalnoj staklenoj tikvici sa okruglim dnom od 1 L i refluks kondenzatorom.
U tikvicu se stavi 100 g natrijum-volframove kiseline, 25 g natrijum-molibdata i 700 ml destilovane vode. Nakon što se soli potpuno otope, u tikvicu se dodaje 50 ml 85% ortofosforne kiseline i 100 ml koncentrovane hlorovodonične kiseline. Sadržaj tikvice je izmiješan, ali dobro izmiješan. Na tikvicu se spoji refluksni kondenzator i smjesa se kuha (ne previše) 10 sati. Vrenje se može izvoditi s prekidima, ali se uzima u obzir samo period ključanja.
Nakon ključanja u smjesu dodajte 150 g litijum sulfata, 50 ml destilovane vode i 5 kapi broma (pažljivo). Da bi se uklonio višak broma, rastvor se kuva 15 minuta bez frižidera na promaji. Nakon hlađenja, gotov rastvor
Za izolaciju, kultivaciju i identifikaciju mikroorganizama u laboratoriju koriste se različiti umjetni hranjivi mediji koji se, ovisno o namjeni, dijele u grupe:
- obične ili jednostavne,- za uzgoj većine aerobnih i fakultativnih anaeroba;
-poseban- za uzgoj mikroba koji ne rastu ili rastu slabo na jednostavnim hranljivim podlogama;
-selektivno- izolovati useve jednog roda ili vrste koji imaju prednost u reprodukciji u odnosu na druge predstavnike mikroflore;
-diferencijalna dijagnostika dizajniran za identifikaciju kulturnih i biohemijskih karakteristika bakterija,
- medij za akumulaciju (obogaćivanje)- koristi se za povećanje broja mikroba, čija je prisutnost u ispitivanom materijalu neznatna, dok suzbija rast strane mikroflore.
Osnova većine životinjskih podloga je mesna voda, za neke je voda iz jetre.
Mesna voda. Svježe nemasno goveđe ili konjsko meso se oslobađa od kostiju, masti i tetiva, propušta kroz stroj za mljevenje mesa ili seče na sitne komade, prelije destilovanom (česmanskom) vodom u omjeru 1:2 (na 500 g mesa 1000 cm3 vode ) i držati 15-18 sati na hladnom mestu. Zatim se infuzija kuha 40 minuta - 1 sat i uklanja se kamenac. Nakon ključanja, voda za meso se ohladi da se stvrdne mast koja se lako uklanja, filtrira kroz filter od pamučne gaze do potpune providnosti, zatim se dolije destilovanom (česme) vodom do prvobitne zapremine, sipa u flaše i steriliše 20 minuta na temperaturi od 120°C i pritisku;
Voda za jetru. Svježa goveđa džigerica, oslobođena filmske masnoće, melje se u stroju za mljevenje mesa i prelije vodom iz slavine u omjeru 1:2, ostavi 1 sat i kuha 30 minuta uz stalno miješanje. Nakon taloženja, mljeveno meso se ukloni, dovede do prvobitne zapremine destilovanom vodom i filtrira kroz filter od pamučne gaze. Jetrena voda izlivena u tikvice se steriliše 30-40 minuta na temperaturi od 112 °C i pritisku od 0,05 MPa.
Hottingerovo osnovno rješenje (digest). 1000 g mesa (junećeg ili konjskog), očišćenog od masnoće i tetiva, isječe se na komade od 1-2 cm, koje se u malim porcijama spuštaju u šerpu sa 2000 cm3 kipuće vode iz slavine. Kuvajte 15-20 minuta dok se proteini ne zgrušaju (boja mesa će postati siva). Meso se vadi šupljikavom kašikom i propušta kroz mašinu za mlevenje mesa, a preostala tečnost se filtrira kroz papirni filter i pH se postavlja na 8,0. Zatim se filtrat pomiješa s mljevenim mesom, ohladi na temperaturu od 40°C u otvorenoj posudi i u dobivenu suspenziju (na 1000 cm3) doda se dva puta zdrobljena gušterača, prethodno očišćena od masti i vezivnog tkiva, u količini od 10%. tečnosti 100 g žlijezde) ili 0,9-1,0% suhog pankreatina (u zavisnosti od njegove aktivnosti).
Dobivena smjesa se dobro promiješa, nakon čega se ponovo alkalizira 10% otopinom natrijum hidroksida ili sode bikarbone do pH 7,8-8,0. Smjesa se sipa u boce sa dobro odabranim gumenim čepom do 2/3 njihove zapremine i na svaki litar smjese dodaje se 10 cm3 x. uključujući hloroform; zatvorite bocu čepom i protresite je nekoliko puta, nakon čega, otvarajući čep, uklonite pare hloroforma i ponovo zatvorite bocu.
1-2 sata nakon dodavanja pankreasa ili pankreatina, provjerite reakciju, postavite pH na 7,4-7,6 i ostavite smjesu da se vari 7-16 dana na sobnoj temperaturi dok se ne stvori talog. Tokom prva 3-4 dana varenja, protresite tečnost dnevno najmanje tri puta dnevno, zatim možete ređe. 1-2 dana prije kraja probave, prestanite sa mućkanjem kako bi se hidrolizat slegnuo.
Enzimska digestija se može provesti u termostatu na temperaturi od 40-42°C tokom 2 dana. Sadržaj boce se promućka 2-3 puta dnevno sa otvorenim čepom. Završetak varenja karakteriziraju sljedeći znakovi: tekućina iznad sedimenta postaje bistra i poprima slamnatožutu boju. Gotov digest se filtrira kroz platneni ili papirni filter, sipa u bocu i steriliše 30 minuta na temperaturi od 120 °C. Pripremljeni hidrolizat može se čuvati pet mjeseci. Pre upotrebe tečnost se ponovo filtrira.
Hemijski pokazatelji gotovog Hottingerovog digestora trebali bi biti sljedeći: ukupni dušik 900-1200 mg%, amino dušik 600-750 mg%, triptofan 200-300 mg%
(Slobodni triptofan se može otkriti u kvalitativnoj reakciji koja se javlja u kiseloj sredini kada je u interakciji sa preparatima hlora; u tu svrhu dodajte 2 kapi octene kiseline u 5 kubnih cm hranljivog medija, dobro promešajte i dodajte nekoliko kapi 1% vodeni rastvor kloramina - pojava ružičaste boje ukazuje na prisustvo triptofana.).
Peptonska voda. Dodajte 10-20 g peptona i 5 g natrijum hlorida u 1000 cm3 destilovane vode, kuvajte 30 minuta dok se pepton ne rastvori, podesite pH na 7,2-7,4, filtrirajte kroz papirni filter dok ne bude potpuno providan, a zatim sterilišite 30 minuta pri pritisku od 0,1 MPa i temperaturi 120 °C.
Umjesto mesno-peptonskog bujona može se koristiti peptonska voda.
Mesno-peptonski bujon (MPB). U 1000 cm3 vode za meso dodati 10 g suvog peptona i 5 g natrijum hlorida, kuvati 30 minuta, uspostaviti potrebnu reakciju, a zatim dodati vodu do prvobitne zapremine. Juha se filtrira kroz papirni filter, na kraju dovede do željene reakcije sa zasićenim rastvorom natrijum bikarbonata (sode bikarbone) ili 10% rastvorom natrijum hidroksida, steriliše 15-20 minuta na temperaturi od 120 °C i pritisku od 0,1 MPa.
Mesno-peptonski bujon namijenjen je uzgoju aerobnih mikroorganizama i proučavanju indikatora rasta u tekućem hranjivom mediju na osnovu zamućenosti podloge, prisutnosti i karakteristika sedimenta, formiranja zidnog prstena i filma.
Mesni pepton agar (MPA). Do 1000 cc. prije sterilizacije u mesno-peptonsku juhu dodati 20 g agara i kuhati na laganoj vatri uz stalno miješanje dok se potpuno ne otopi.
Meso-peptonski agar, ohlađen na temperaturu od 50-55°C, bistri se bjelanjkom (po stopi od jednog proteina na 1000 cm3 mesno-peptonskog agara), stavlja se u autoklav bez odvrtanja poklopca autoklava, ili u kipućoj vodenoj kupelji kako bi se protein zgrušao. Vrući mesno-pepton agar se filtrira kroz filter od pamučne gaze, pH se postavlja na 7,2-7,4, sipa se u tikvice ili epruvete i sterilizira 20 minuta u autoklavu na temperaturi od 120°C.
Meso-pepton agar je namijenjen za uzgoj aeroba i proučavanje obrasca rasta mikroba prema veličini i obliku kolonija, rubnoj liniji, boji, sjaju, prozirnosti, konzistenciji i nekim drugim karakteristikama.
Polutečni agar (SLA). Do 1000 cc. mesno-peptonskog bujona, dodati 3-4 g agara i otopiti na laganoj vatri uz stalno miješanje, filtrirati kroz platneni filter do potpune providnosti, sipati u epruvete od 5 cm3 i sterilizirati u autoklavu na temperaturi od 120°C i pritisak od 0,1 MPa tokom 30 min.
Gotov polutečni agar se hladi kolonom, podloga treba da bude potpuno prozirna.
Polutečni agar se koristi za određivanje pokretljivosti mikroorganizama. U tu svrhu, sjetva testnih kultura se vrši ubrizgavanjem u kolonu podloge, bez probijanja 5-6 mm do dna: pokretne kulture daju difuzan rast i uzrokuju zamućenje cjelokupnog hranljivog medija, nepokretne kulture rastu injekcijom, medij ostaje providan, sojevi sa slabom pokretljivošću zamagljuju pojedina područja agara, obično u blizini injekcije.
Nutrient želatin (NGE). Na 1000 cm3 mesno-peptonske juhe dodajte 100 g vrhunske jestive želatine. Nakon bubrenja, želatin se otapa 1-2 sata uz polagano zagrijavanje u vodenoj kupelji na temperaturi od 40 - 50 ° C dok se potpuno ne otopi. Postavite pH na 7,2 sa 10% rastvorom natrijum bikarbonata i filtrirajte kroz papirni filter dok je vruć. Ako je podloga zamućena, bistri se bjelanjkom od pilećeg jajeta, zatim se vruće filtrira kroz filter od pamučne gaze i sipa u epruvete od 7-8 cm3, sterilizira u frakcijama od 3 dana po 30 minuta ili jednom na temperaturi od 110°. C i tlakom od 0,04 MPa 30 min. Nakon sterilizacije, medijum se hladi kolonom.
Podloga je namijenjena za određivanje proteolitičke aktivnosti mikroba za ukapljivanje želatine. Budući da je rastvorljivi protein dobijen iz nerastvorljivog kolagena, pod dejstvom enzima želatinaze podleže hidrolizi i gubi svojstva želiranja, usled čega ostaje tečan na niskim temperaturama.
Broth Hottingera. Na 1000 cm3 glavnog rastvora dodajte 500 cm3 vode iz slavine ili destilovane vode, 3 g natrijum hlorida i 0,12 g dikalijum fosfata. Dobijeni rastvor se kuva 15-20 minuta, pH se postavlja na 7,2-7,4 i filtrira kroz pamučno-gazu ili papirni filter, zatim sipa u tikvice ili epruvete i steriliše 20-30 minuta na temperaturi od 120°. C i pritisak 0,1 MPa.
U Hottinger bujonu se proučava obrazac rasta mikroorganizama u tečnom hranljivom mediju.
Martinova srijeda. Svježi svinjski želuci se oslobode od masnoće i sadržaja i prođu kroz mašinu za mljevenje mesa. Za 250 g mljevenog mesa dodajte 1000 cm3 tople (50 °C) prokuhane vode iz slavine i 10 cm3 koncentrovane hlorovodonične kiseline. Smjesa se drži na temperaturi od 45-50°C 24 sata uz povremeno mućkanje, a zatim se zagrijava na pari 30 minuta i ostavi na hladnom mjestu 5 dana. Supernatantna tečnost se ocijedi, filtrira kroz papirni filter, sipa u tikvice i steriliše na temperaturi od 120 °C i pritisku od 0,1 MPa 30 minuta. Nastali Marten pepton se čuva do 3 mjeseca.
Mljeveno meso se priprema od goveđeg mesa, oslobođenog sala i tetiva. U 500 g mljevenog mesa dodajte 1000 cm3 destilovane vode. Dobivena smjesa se drži na 4-8 °C 24 sata, nakon čega se kuha na laganoj vatri 2 sata, uz stalno dodavanje vode do prvobitne zapremine. Mleveno meso se istisne i ukloni, voda od mesa se filtrira kroz papirni filter, sipa u tikvice i steriliše na temperaturi od 120°C i pritisku od 0,1 MPa 30-40 minuta. Pripremljeni medijum se čuva na temperaturi od 4-8 °C do 3 meseca.
Za pripremu tečnog medija pomiješaju se jednake količine Martinovog peptona i mesne vode, pH se postavi na 8,0-8,2, sipa se u tikvice i sterilizira na temperaturi od 120 °C i tlaku od 0,1 MPa 30 minuta. Juha se može čuvati ne više od mjesec dana.
Martinov agar. U Martinovu podlogu (Martinova juha), zagrijanu na 50-60 °C, dodajte sitno isjeckani oprani agar-agar u količini od 25 g na 1000 cm3, povremeno miješajući, prokuhajte da se agar potpuno otopi. Vruće filtrirati kroz filter od pamučne gaze, sipati u tikvice i sterilisati u autoklavu na temperaturi od 120 °C i pritisku od 0,1 MPa 30 minuta.
Bujon i Marten agar namijenjeni su za uzgoj anaerobnih i mikoplazmi.
- Hranljivi mediji. Dio 2. Selektivni diferencijalno dijagnostički mediji za primarnu identifikaciju enterobakterija.
Mesno-peptonski bujon (MPB). Za pripremu mesno-peptonskih medija koristite mesna čorba, koji se dobija na sledeći način: 500 g sitno iseckanog svežeg mesa bez kostiju, masti i tetiva prelije se u emajliran tiganj sa 1 litrom vode iz slavine zagrejane na 50°C i ostavi da odstoji 12 sati na sobnoj temperaturi ili 1 sat na 50-55°C. Meso se istisne, ekstrakt se filtrira kroz gazu sa slojem vate, prokuvati 30 min za koagulaciju koloidnih proteina i dva puta filtrirati (prvi put kroz gazu sa vatom, drugi put kroz papirni filter). Filtrat se dodaje vodom do 1 litre, sipa u tikvice, zatvara čepovima od pamučne vune i steriliše na 120°C 20 minuta (čepovi tikvica se odozgo zatvaraju papirnim poklopcima). Pamučni čepovi trebaju biti zategnuti, jer služe kao filter koji sprječava ulazak bakterija iz zraka nakon sterilizacije.
Mesnu juhu možete koristiti u bilo koje vrijeme za pripremu odgovarajućih podloga. Ako se pripremaju odmah, tada nije potrebna prethodna sterilizacija mesne juhe.
Često se u laboratorijskim uslovima zajedno sa mesom kuva mesna infuzija, a zatim se meso istiskuje. Ovo rezultira kvalitetnom čorbom. Ako vam je potrebna mesna juha posebno visoke nutritivne vrijednosti, dodajte malo pepsina dok meso ulijevate vodom i zakiselite juhu hlorovodoničnom kiselinom. Pepsin potiče dodatnu hidrolizu proteinskih spojeva mesa, a kao rezultat toga, povećava se količina nutrijenata dostupnih bakterijama. Meso se može zamijeniti mesnim ekstraktom (5 g na 1 litar podloge).
Za pripremu MPB dodajte 5-10 g u 1 litar mesne juhe pepton(prvi proizvod hidrolize proteina) za povećanje kalorijskog sadržaja podloge i 5 g kuhinjska so za stvaranje osmotske aktivnosti. Medijum se zagreva dok se pepton ne rastvori, uz stalno mešanje.
Zatim se uspostavlja neutralna ili blago alkalna reakcija medijuma dodavanjem 20% rastvora Na 2 CO 3 dok mokri crveni lakmus papir ne postane plavi. Pogodno je koristiti indikator za provjeru pH podloge bromthymolblau: 1-2 kapi pomešati u porculanskoj šoljici sa jednom kapi čorbe. U neutralnom okruženju, bromothymol blau je boca zelene boje, u kiseloj sredini je žuta, au alkalnoj je plava.
Nakon što se uspostavi pH, medijum se ponovo kuva 5-10 minuta, a proteini koji su se zgrušali pri promeni reakcije medijuma filtriraju se kroz papirni filter bez bistrenja bujona ili bistrenja proteinom. Da biste to učinili, umutite svježi bjelanjak sa duplom količinom vode i pomiješajte s čorbom ohlađenom na 50 °C. Mešavina se kuva na laganoj vatri, mešajući, 10 minuta, a zatim se filtrira. Prozirni mesno-peptonski bujon se sipa u epruvete, zatvara pamučnim čepovima i steriliše na 120 °C 20 minuta.
Mesni pepton agar (MPA). Dodajte 15-20 g agara u 1 litar MPB. Medij se zagreva dok se agar ne otopi (talište mu je 100°C, temperatura očvršćavanja 40°C), medij je blago alkalan sa 20% rastvorom Na 2 CO 3 i sipa se kroz levak u epruvete (približno 10 ml agara u koloni za naknadno sipanje u Petrijeve posude i po 5 ml za dobijanje kosih agara - plićaka).
Kada sipate agar, morate osigurati da rubovi epruveta ostanu suvi, inače će se čepovi zalijepiti za staklo. Epruvete sa medijumom se sterilišu u autoklavu na 120 °C 20 minuta.
Mesno-peptonski želatin (MPG). U 1 litar MPB dodajte 100-150 g želatine. Tačka topljenja želatine zavisi od njenog sadržaja u medijumu: u slučaju koncentracije od 10% u medijumu, topi se na 24°C; u slučaju 15% - na 25 °C. Ljeti se podloga priprema dodavanjem 15% želatine.
Nakon otapanja želatine, uz pažljivo zagrevanje, uspostaviti blago alkalnu reakciju medijuma (kao za MPB i MPA), kuvati 5 minuta, a zatim ohladiti na 40-50°C. Umućen bjelanac sa malo vode sipa se u ohlađenu želatinsku podlogu, dobro promućka i ponovo zagreje. Nakon što se proteini talože, medijum postaje providan. Vruće se filtrira kroz papirni filter, sipa u epruvete i steriliše u Koch kotlu sa strujom parom, zagrevajući medij 3 puta po 30 minuta svaka 24 sata.
Krompir agar. 200 g oljuštenog i opranog krompira iseći na ploške, dodati 1 litar vode iz česme, kuvati 30 minuta. Juha se filtrira kroz vatu i dodaje se voda do prvobitne zapremine. U nastalu tečnost se dodaje 2% agar, kuva dok se ne rastopi i podloga ne postane neutralna (pH = 7). Medijum se steriliše 20 minuta na 1 atm 1 .
Pivska sladovina i sladovina-agar. Zrna ječma se potapaju u hladnoj vodi i klijaju na 35 °C. Nakon što klice postanu duplo duže od zrna, potonja se suše do zračno suvog stanja (moguće uz lagano zagrijavanje), čime se dobiva slad. Za pripremu sladovine slad se grubo melje i miješa sa vodom (250 g slada na 1 litar vode). Da bi se enzim amilaze bolje izolirao, smjesa se zagrijava na 57°C dok reakcija na škrob ne nestane (plava boja s jodom). Ispitivanja saharifikacije škroba se izvode u porculanskoj čaši u kapi tekućine.
Sladovina se procijedi kroz vatu, a zatim filtrira kroz papirni filter. Ova sladovina sadrži 10-20% šećera. Njegov tačan sadržaj određuje se gustinom otopine pomoću saharimetra. Sladovina se razblaži vodom do koncentracije šećera od 6-8% i steriliše 30 minuta na 115 °C i pritisku od 0,5 atm. Gotova sladovina se može nabaviti u pivari.
Za kuvanje agar od sladovine Pivskoj sladovini se dodaje 2,5-3% agara, kuva dok se ne otopi, filtrira kroz vatu i steriliše pod istim uslovima kao i pivska sladovina.
Obrano mlijeko. Za pripremu podloge za uzgoj koristi se obrano mlijeko, takozvano obrano mlijeko, jer masnoća u mlijeku negativno utiče na rast određenih mikroorganizama. Obrano mlijeko se dobija odvajanjem mlijeka zagrijanog na 34 °C. Masnoća se takođe može ukloniti kada se mleko slegne.
Prilikom sterilizacije treba imati na umu da se mlijeko ne može dugo držati u autoklavu, jer se laktoza (mliječni šećer) sadržana u mlijeku može karamelizirati.
Obrano mlijeko se sipa u sterilne epruvete i drži na 115 °C (pritisak 0,5 atm) 10 minuta. Pre sterilizacije, kiselost obranog mleka ne bi trebalo da pređe 22° Turner, inače će se mleko zgrušati. Nakon sterilizacije, drži se u termostatu na 30°C 3 dana. izazvati razvoj spora i drugih oblika otpornih na toplinu. Nakon 3 dana, epruvete sa mlijekom se pregledavaju i one u kojima su se razvili mikroorganizmi se odbacuju.
Prilikom sterilizacije u autoklavu ponekad je moguće posmeđivanje mlijeka zbog karamelizacije mliječnog šećera i peptonizacije kazeina. Tokom duže sterilizacije, na dno epruvete pada precipitat kazeina koji se može djelomično peptonizirati. Pregrijano smeđe mlijeko ne može se koristiti kao medij.
Mediji kvasca. Voda sa kvascem. 50-100 g suhog kvasca razrijedi se u 1 litru vode, kuha se 10 minuta, procijedi kroz papirni filter i sterilizira na tekućoj pari 30 minuta svaki dan 3 dana.
Autolizat kvasca. 200 g prešanog kvasca razrijedi se u 1 litru vode; dodati 2 g Na 2 HPO 4, kapi I N. Rastvor NaOH (do pH 6,1) i 5 ml hloroforma, držani na 37 °C 2 dana, podešen rastvorom NaOH na pH 7,4, kuvan 30 minuta. filtrira kroz papirni filter, sipa u posude i steriliše na 115° WITH 30 min.
Ekstrakt kvasca. 1 kg prešanog kvasca razrijedi se u 1 litru vode, smjesa se kuha 1 sat, filtrira tri puta kroz papirni filter i sterilizira na 115°C 30 minuta.
Juha od pasulja. 50 g pasulja (najbolje bijelog) sipa se u 1 litar vode iz slavine i kuha dok ne omekša da se pasulj ne prekuha. Dobivena juha se filtrira kroz vatu, doda se 10 g šećera i dovede do prvobitne zapremine. Medij je blago alkalan, sipa se u tikvice i steriliše u autoklavu 30 minuta pod pritiskom pare od 1,5 atm.
1 Prema SI sistemu, pritisak se obično izražava u pascals(Pa): 1 atm = 1,01325 x 10 5 Pa = 0,1 MPa.
