Podloga za izolaciju gonokoka je suha. Set reagensa "Hranljivi medij za izolaciju gonokoka, suvi" (GNK agar)

Set reagensa “Hranljivi medij za izolaciju gonokoka, suvi” (GNK agar) je namijenjen za mikrobiološke svrhe. Koristi se za izolaciju gonokoka prilikom proučavanja zaraženog materijala, kao i kao podloga za uzgoj i čuvanje gonokoka u istraživačkom radu.
Komplet reagensa dostupan je kao set od dvije liofilizirane komponente:

• osnove hranljivog medija - liofilizat od zapremine od 100 ml u boci - 1 komad;
• dodatak bazi hranljivog medijuma - liofilizat od zapremine 24 ml u boci - 1 kom.

Compound: osnova hranljive podloge - ekstrakt mesa kunića, suvi enzimski pepton za bakteriološke potrebe, natrijum hlorid, autolizat pekarskog kvasca, orotna kiselina, mikrobiološki agar. Dodatak bazi hranljive podloge - normalna tečna konjska surutka za bakteriološke hranljive podloge, autolizat pekarskog kvasca, aminopeptid za mikrobiološke hranljive podloge.

Priprema: 100 ml sterilne prečišćene vode se dodaje u bocu sa bazom hranljivog medijuma i drži (30±5) minuta, zatim stavlja u ključalu vodenu kupelj dok se agar potpuno ne otopi, a nakon topljenja agar se drži u vodeno kupatilo ne duže od 5 minuta. U bocu dodati 24 ml sterilne prečišćene vode sa dodatkom hranjive podloge i ostaviti (20±2) minuta do potpunog rastvaranja na temperaturi od 20-25°C. Rastvoreni aditiv se prebacuje u rastvorenu bazu ohlađenu na temperaturu od (50±2)°C, 3 ml se sipa u sterilne epruvete i kosi 0,5 ml sterilnog rastvora natrijum hlorida dodat u svaku epruvetu da navlaži medijum. Medijum se takođe može sipati 10-15 ml u sterilne Petrijeve posude. Epruvete ili posude sa hranljivim medijumom stavljaju se na (24±1) sat u termostat na temperaturi od (37±1)°C radi kontrole sterilnosti. Pripremljeni hranljivi medij se čuva na temperaturi od (6±2)°C do 7 dana.

Princip rada: set reagensa treba da osigura rast svakog test soja Neisseria gonorrhoeae "Loshakov" i Neisseria gonorrhoeae "Denisov" kada se inokulira 0,5 ml mikrobne suspenzije iz razblaženja od 10"5 nakon 24 - 48 sati inkubacije na temperaturi od ( 37 ± 1) °C u obliku providnih ili prozirnih bezbojnih kolonija veličine od 0,5 do 2 mm sa glatkim ivicama.

Sprovođenje analize: Rezultati inokulacije se bilježe nakon 24, 48 i 72 sata inkubacije na temperaturi od (37±1)°C. primećeno nakon 24-72 sata. Ako nema rasta gonokoka, usjeve držite u termostatu do 7 dana.

Pakovanje: Polietilenske tegle od 0,25 kg za pripremu 3,6 litara medijuma.

Rok trajanja - 1 godina.

Cijena je data sa PDV-om po 1 kg.

Efikasnost metode bakteriološkog istraživanja u

je u velikoj mjeri određena kvalitetom hranljivih podloga. IN

U našoj zemlji se najviše testiraju i koriste dvije vrste

hranljive podloge: ascites-agar i hranljive podloge bez ascitesa.

Osnova oba podloga je mesni penton agar (MPA) iz mesa

zečeve ili svježa volovska srca. Način njegove pripreme

je kako slijedi. Meso kunića je oslobođeno masnoće i

tetive, propuštene kroz mlin za meso ili iseckane nožem,

izvagane, ispunjene dvostrukom zapreminom voda iz česme iu ovome

formu ostavite u frižideru na 4°C jedan dan za ekstrakciju.

Zatim se masa zagreje do ključanja, kuva 10 minuta, ohladi i

filtrirati kroz gazu. Filtratu dodati 2% agar-agara, 1%

peptona i 0,5% natrijum hlorida, zagrijavajte dok se agar-agar ne otopi

i postaviti pH=7,5-7,6 (alkalizacija je 20%

rastvor natrijum hidroksida). Prokuhajte medijum, filtrirajte

kroz pamučno-gazni filter, sipa se u sterilne boce ili

tikvice i sterilizirati u autoklavu 15-20 minuta na 0,5 atmosfere

manometar (112e).

Tehnika pripreme MPA od svježih goveđih srca je ista kao

samo kuhati masu zgnječenih srca u vodi

proizvesti 20 minuta umjesto 10.

Moguće je pripremiti bazu hranljive podloge bez peptona.

U ovom slučaju koriste gornju metodu za pripremu MPA, ali

pepton je isključen iz njegovog sastava, sjeckano meso kunića se kuha

5 minuta umjesto 10 i sterilizirajte medij u autoklavu 10 minuta

minuta na 0,8 atmosfere na manometru (117o).

Ascites agar

Ascitičnu tečnost treba uzeti od pacijenata sa

ascitesa uzrokovanog zatajivanjem srca, i

proizveden kroz trokar u sterilnu bočicu i dodati joj 5%.

hloroform za anesteziju. 10 dana tečnost se meša sa

hloroforma rotirajući bocu, a zatim je ostavite

sobnoj temperaturi dok se hloroform potpuno ne slegne na dno boce

i čišćenje tečnosti. Nakon toga, ako je potrebno, transparentno

ascitna tečnost se sipa u sterilne tikvice od 50 ml sa

pamučne čepove i svakodnevno se stavljaju 3 dana

vodeno kupatilo na temperaturi od 56°C tokom 1 sata da bi se hloroform ispario

kroz pamučni čep. Nakon provjere ascitične tekućine za

sterilnost može se koristiti za obogaćivanje

hranljiva podloga za izolaciju gonokoka u koncentraciji od 1/3 i 1/4

zapremine medijuma, koja je određena eksperimentalno.

Recepti za podloge bez ascitesa

1. MPA iz mesa kunića ili svježih goveđih srca

(pH=7,4-7,5) - 100 ml kazein hidrolizat za parenteralnu

proteinska ishrana - 2 ml, autolizat kvasca - 2 ml, surutka

krv goveda - 20 ml (medij KDS-1).

2. MPA iz mesa kunića ili svježih goveđih srca

(pH=7,4-7,5) - 100 ml, 5% rastvor hemohidrolizata - 2 ml,

autolizat kvasca - 2 ml, serum goveđe krvi

goveda - 20 ml (srednja GDS-2).

3. MPA iz mesa kunića ili svježih goveđih srca

(pH=7,4-7,5) - 100 ml, medijum 199 za kulture tkiva bez

antibiotici - 20 ml, autolizat kvasca - 2 ml, krvni serum

goveda - 20 ml (srednja 199-SDS).

4. MPA iz mesa kunića ili svježih goveđih srca

(pH=7,4-7,5) - 100 ml, svježe žumance pilećeg jajeta - 10 ml,

serum goveda - 20 ml (JS medijum).

Žumance se dobija sterilno iz dijetalnih kokošjih jaja

neposredno prije pripreme podloge. Za ovo,

Nakon prethodnog tretmana alkoholom, školjka se otvara sterilnom

pincetom i sipajte sadržaj jajeta u sterilni lijevak. Poslije

Nakon što bjelanjak iscuri, prebacuje se žumance koje je ostalo u lijevu

sterilne posude i mjernu pipetu uzimaju potrebne

proizvodnja hranljivog medijuma zapremine žumanca.

Priprema autolizata kvasca je kako slijedi.

Pekarski kvasac se drobi i stavlja u bocu veću od

zapremina kvasca uzeta je 4 - 5 puta, a ostavljena na autolizu za dva

dana u sušioniku ili termostatu na 60°. Onda gusta

smeđa masa se razblaži sa trostrukom zapreminom tople vode iz slavine

vode, dobro promešati i centrifugirati dva puta po 10 minuta na

1000 o/min (dok se tečnost ne izbistri). Supernatant

tečnost se ispusti, doda se 0,5% natrijum hlorida, dotera se

pH na 7,4-7,5 i autoklavirajte 30 minuta na 1 atmosferi

manometar (120°). Čuvati u malim pakovanjima u frižideru na

Autolizat kvasca može se zamijeniti 1,5% otopinom

ekstrakt krmnog kvasca (EKD) u istoj količini (2 ml) 1,5%

EKD rastvor se priprema u laboratoriji od suvog EKD-a rastvaranjem u njemu

sterilna destilovana voda. Ovako kuvano

tečni ekstrakt se sipa u sterilne epruvete i steriliše

autoklavirati na 0,5 atmosfere na manometru 20 minuta.

U svim gore navedenim hranjivim podlogama, krvni serum

goveda se mogu zamijeniti normalnim domaćim

serum za bakteriološke podloge za kulturu, koji

je isti serum, ali sa dodatkom konzervansa.

Priprema obogaćenog medija

MPA, koji se nalazi u boci ili tikvici, topi se u vodi

kupke, ohladiti na 56-58° i dodati sastojke

omjere navedeni ranije u receptima. Obogaćen MPA 3-3.5

ml se sipa u sterilne epruvete, medijum se kosi i navlaži

0,5 ml sterilne mesne peptonske čorbe ili izotonika

rastvor natrijum hlorida nakon što se stvrdne. Za provjeru

Da bi se osigurala sterilnost, podloga se stavlja u termostat na 35-37°C dnevno.

Svi navedeni mediji bez ascitesa, osim medija za jaja, su transparentni,

Na njima je lako razlikovati kolonije mikroorganizama. srijeda,

obogaćen jajetom, mutan je, žut je, narastao

Njegove kolonije, posebno gonokoki, slabo se razlikuju. Međutim, rast

gonokoka ima u izobilju na ovoj podlozi i njegove kolonije lako mogu biti

otkriveno tretiranjem rasta sa 1% rastvorom

dimetilparafenilendiamin ili drugi oksidazni reagens,

koji kolonije gonokoka pretvara u crvene, dobro

u kontrastu sa žutom pozadinom okoline. Upotreba žumanca

okruženja bez tretiranja rasta mikroorganizama oksidaznim reagensom nije

Kvalitet svakog nova serija laboratorijski hranljivi medij

proizvodnja se mora provjeriti sjetvom na njoj

patološki materijal od pacijenata s bakterioskopskim

pronađeni su gonokoki.

Rok trajanja MPA u frižideru na 4°C ne bi trebao biti duži od 1

mjesec, obogaćena sredina - 7 dana.

Zbog činjenice da je za gore navedeno okruženje moguć kratak vremenski period

skladištenja, razvijen je proizvodni metod

liofilizirani hranljivi medij bez ascitesa, koji je ispod

pod nazivom "Hranljivi medij za izolaciju gonokoka, suvi"

Dostupan u dvije boce: dio I (srednja baza) i dio II

(sredstva za obogaćivanje). Za pripremu radnog okruženja u dijelu I

potrebno je dodati 100 ml sterilne destilovane vode i zagrijati

u vodenom kupatilu na 100° dok se sadržaj boce potpuno ne otopi

(unutar 30 minuta). Dodatno vrijeme za držanje medija u vodi

Nema potrebe za kupanjem, jer to umanjuje njen kvalitet. Dio II uključuje

24 ml sterilne destilovane vode (otapanje obogaćivanja

supstance se javlja odmah). Zatim, ako su uslovi ispunjeni

sterilnost, II deo se prenosi u deo I, ohlađen na 56°C,

pomešati, sipati u sterilne epruvete, pokositi i

hidratizirati kao što je ranije opisano.

Suha podloga se priprema od mesa kunića ili goveđeg srca,

pored tvari za obogaćivanje navedenih u receptu 1 (medij KDS-1)

sadrži orotnu kiselinu u koncentraciji od 1 μg/ml. srijeda

Visoka kvaliteta, pogodan za upotrebu u bakteriološkim

laboratorije, jer Za pretvaranje suvog okruženja u radno okruženje potrebno je

samo sterilna destilovana voda.

Koristeći hranljivu podlogu bez ascitesa sa dodatkom

daje antibiotike i orotnu kiselinu dobri rezultati at

bakteriološka dijagnostika, uključujući ekstragenetsku

gonoreja: gonoreja krajnika i ždrijela, rektuma. Antibiotici

dodano za suzbijanje rasta pratećeg gonokoka

bakterijska flora, koja povećava intenzitet rasta gonokoka,

olakšava detekciju pojedinačnih kolonija i izolaciju u čistom

kulture. Dodati 20,0 U/ml polimiksin M sulfata i 6,2 U/ml

ristomicin sulfat; umjesto ovog drugog možete koristiti

linkomicin hidrohlorid - 2 μg/ml. Orotska kiselina se ubrizgava u

sastav hranljive podloge u količini od 1 μg/ml.

Da biste to učinili, uzmite uzorak orotne kiseline 1 mg (1000 μg) i

razrijeđen u 1,0 ml sterilne destilovane vode (dob

radni rastvor koji sadrži 1000 mcg koji se može čuvati u

u frižideru 10 dana) i sterilizirati u vodenom kupatilu 15

minuta, zatim uzmite 0,1 ml dobijenog rastvora i dodajte u

100 ml obogaćene hranljive podloge. Okruženje sa antibioticima

mora se koristiti istovremeno sa podlogom bez antibiotika

(jedna epruveta sa medijumom sa antibioticima, druga bez njih), jer

iako rijetki, postoje sojevi gonokoka koji su osjetljivi na

gore navedenim antibioticima.

Medij za skladištenje (transport).

Sastav medijuma za konzerviranje: 1) 1 litar destilovane vode,

bez hlora, 30 g agar-agara; 2) 900 ml destilovan

voda bez hlora, 2 ml tioglikolne kiseline, 12 ml 1M

rastvor natrijum hidroksida, 100 ml 20% vodenog rastvora natrijuma

monosupstituisani fosfat, 20 ml 1% rastvora hlorida

kalcijum. Posljednja smjesa (2) se dodaje u svježe pripremljeno

agar (1), podesiti pH na 7,3-7,4, sipati 10 ml medijuma u

sterilne epruvete, sterilisane tekućom parom 1 sat.

Pamučni štapići na drvenim štapićima ili šipkama

nerđajući čelik prečnika oko 2 mm, montiran u pamuk

čepove, kuvati 20 minuta u fosfatnom puferu, pH = 7,4, i

impregnirati 24 sata u 1% vodenoj suspenziji tanko

drobljeni ugalj. Nakon sušenja, pamučni štapići

korigiran, ubačen u bakteriološke epruvete

odgovarajući prečnik (jednak prečniku epruveta sa medijumom) i

Sterilizirajte u autoklavu 20 minuta na 1 atmosferi (temp

Za pripremu fosfatnog pufera pripremite dva rastvora: 1

rastvor - 28,4 g natrijuma rastvorenog u 1 litru destilovane vode

disupstituirani fosfat (0,2M); 2 rastvora - u 1 l

destilovane vode rastvoriti 27,8 g limunska kiselina(0,1 M).

Pomešati 181,7 ml rastvora 1 i 18,3 ml rastvora 2.

Proizvodnja usjeva korištenjem medija za zaštitu

provodi se na sljedeći način. Doktor pregleda pacijenta

izvadi tampon iz epruvete, umetne ga u mjesto bolesti

nekoliko sekundi za namakanje (možete nekoliko

pokretima u smjeru kazaljke na satu i suprotnom smjeru kazaljke na satu), uklanja ga bez dodirivanja

okolne predmete u epruvetu sa medijumom za konzervaciju. Na vrhu

Pomoću pamučnog čepa zatvorite epruvetu gumenom bradavicom. Prije slanja

materijala u bakteriološku laboratoriju, kulture se čuvaju na 4°C

u frižideru minimalni rok, ali ne duže od jednog dana. Istovremeno

uzeti patološki materijal i napraviti bris za

bakterioskopski pregled, koji se šalje na

laboratoriju zajedno sa kulturom. U bakteriološkoj laboratoriji

odmah po prijemu briseva sa patološkim materijalom

uklanja se iz medija za skladištenje i koristi za sjetvu na površini

kosi hranljivi medij u epruvetama. Svaki tampon pravi

inokulacija na hranljivu podlogu u dve epruvete. Sjetva na površini

hranljivi medij treba proizvoditi cik-cak pokretima

duž površine medija, rotirajući štapić. Ako je prečnik epruveta

medij za konzerviranje i hranjivi medij su slični, možete koristiti bris

nakon inokulacije ostaviti u drugoj epruveti u kontaktu sa

hranljivi medij. Usjevi se stavljaju u termostat i uzgajaju na

36-37e u eksikatoru. Imajte na umu da prilikom korištenja

očuvanju okoline, rast gonokoka može nastupiti kasnije nego u

direktna inokulacija patološkog materijala na hranjivu materiju

Rad sa usevima

Uzgoj gonokoka se može vršiti u epruvetama ili

Petrijeve posude; prvi metod omogućava značajne uštede

okruženje. Da bi se povećao procenat inokulacije gonokoka, sija se

hranljive podloge se stavljaju u termostat u eksikator sa 20%

reakcije između sumporne kiseline i natrijum bikarbonata: u eksikatoru

stavlja se zapremina od 5 litara staklo sa 50 ml 10% sumporne kiseline, in

Laboratorijske metode se široko koriste u dijagnostici spolno prenosivih bolesti genitourinarnog sistema: gonoreje, sifilisa, trihomonijaze itd. Prisustvo bolesti zahtijeva mjere za identifikaciju uzroka infekcije.

SVG hranljiva podloga je namenjena za izolaciju i kultivaciju gonokoka prilikom proučavanja materijala od pacijenta. Svaki komplet je dizajniran za pripremu 110 ml gonokokne podloge, spremnog za upotrebu.

Postavite sadržaj

Komplet za dobijanje hranljive podloge treba čuvati na temperaturi od 2 - 8 °C ne duže od 12 meseci. Čvrsta hranljiva podloga može se čuvati u epruvetama ili Petrijevim posudama ne duže od 7 dana. Komplet za pripremu hranljivog medijuma uključuje:

• baza: agar, ekstrakt kvasca, pepton, skrob, soli;
• selektivni aditiv: koenzimi, lizat eritrocita, antifungici, antibiotici, šećeri;
• upute za korištenje kompleta.

Metodologija

Tehnika uključuje nekoliko faza, od kojih se svaka mora odvijati u skladu s određenim zahtjevima. Po završetku svih faza dijagnostike bolesti metodom kultivacije uzročnika na gonokoknoj podlozi, rezultati se bilježe nakon 24 sata, 48 sati i 72 sata. Kod akutne gonoreje, rast gonokoka se opaža tokom prvog dana, kod hronične gonoreje - do 72 sata.

Priprema rastvora podloge za kulturološke dijagnostike vrši se tako što se baza ulije u posudu koja sadrži destilovanu vodu (100 ml) radi naknadnog bubrenja. Dobivena suspenzija se stavlja u vodeno kupatilo i povremeno se miješa dok se baza potpuno ne otopi, a zatim se otopina kuha 2 minute. Rastvor selektivnog aditiva priprema se otapanjem u destilovanoj vodi (10 ml) uz mešanje.

Gotovi hranljivi medij se formira dodavanjem rastvora selektivnog aditiva u bazni rastvor. Dobijeni medij se sipa u sterilne Petrijeve zdjelice. Prije izvođenja studije, gonokokna podloga mora se držati sat vremena na temperaturi od 37 °C. Zatim se materijal inokulira u skladu sa naredbom Ministarstva zdravlja „O objedinjavanju mikrobioloških (bakterioloških) metoda istraživanja koje se koriste u kliničko-dijagnostičkim laboratorijama medicinskih ustanova“.

Ovaj agar sa dodatkom krvi, hemoglobina ili drugih aditiva preporučuje se za selektivnu izolaciju gonokoka.

spoj**:

** Sastav je verifikovan i prilagođen kako bi zadovoljio tražene parametre

Priprema:

Pomiješajte 7,2 g praha u 100 ml destilovane vode kako biste pripremili medij dvostruke jačine. Zagrijte do ključanja da se čestice potpuno otopi. Sterilizirajte autoklavom na 1,1 atm (121°C) 15 minuta. Ohladiti na 50°C i aseptički dodati posebno pripremljenih 100 ml 2% sterilnog rastvora hemoglobina (FD022) i GC dodatak (FD021). Dobro promiješajte i sipajte u Petrijeve posude. Da bi se dala selektivna svojstva, u medijum se mogu dodati antibiotici uključeni u sledeće aditive: VNC (FD023), VCNT (FD024), Linco T (FD026), Vanco (FD028).

Za pripremu čokoladnog agara pripremite medij normalne koncentracije miješanjem 3,6 g praha u 100 ml destilovane vode. Sterilizirajte, dodajte do 5% (v/v) sterilne defibrinirane krvi i zagrijte medij na 80°C 10 minuta.

Princip i evaluacija rezultata:

Ovaj agar sa dodatkom krvi ili hemoglobina i drugih aditiva preporučuje se za selektivnu izolaciju i kultivaciju tako izbirljivih mikroorganizama kao što su gonokoki i bakterije Haemophilus influenzae. Johnston je razvio čokoladni agar na kojem se rast mogao postići u roku od 24 sata Neisseria gonorrhoeae(1). Kasnije su drugi autori (2) poboljšali podlogu uvođenjem hemoglobina u njen sastav.

Agar sadrži poseban pepton - izvor hranjivih tvari za mikroorganizme. Škrob pomaže u neutralizaciji toksičnih supstanci koje proizvodi Neisseria, a fosfati sprječavaju promjenu pH vrijednosti koja je rezultat stvaranja amina, što također može utjecati na rast i održivost mikroorganizama. Hemoglobin služi kao izvor faktora X za hemofilne bakterije. Drugi aditiv obogaćuje podlogu faktorom V (NAD, nikoninamid adenin dinukleotid), neophodnim za Haemophilus influenzae, kao i aminokiselinama, vitaminima, ionima gvožđa itd., koji stimuliše rast patogene neiserije.

Nemojte koristiti pamučne štapiće za prikupljanje materijala. Sjetva se vrši odmah nakon sakupljanja materijala. To se mora učiniti tako da postoje zone gustog i rijetkog rasta. Inokulacija se inkubira na 37°C u atmosferi od 5-10% ugljičnog dioksida i 70% vlage. Sve sumnjive kolonije treba testirati biohemijskim i/ili serološkim testovima.

Kontrola kvaliteta:

Izgled pudera:

Homogeni sipki svijetložuti prah.

Gustina gotovog medija:

Formira se medij koji po gustini odgovara 1,0% agar gelu.

Boja i prozirnost gotovog medija:

Baza medijuma je svetlo žute boje, providna ili blago opalescentna. Nakon dodavanja hemoglobina, medij postaje čokoladno smeđi i neproziran ako se u Petrijevim posudama formira gel.

Kiselost okoline:

Na 25°C, vodeni rastvor (3,6% w/v) ima pH od 7,2 ± 0,2.

Kulturna dobra:

Karakteristike rasta referentnog soja nakon 40-48 sati na 35-37°C na čokoladnom agaru pripremljenom na ovoj osnovi, u prisustvu atmosfere od 5-10% ugljičnog dioksida i 70% vlage.

Gonokoki su grahastog oblika, raspoređeni u obliku diplokoka, okruženi mikrokapsulom, nemaju flagele i ne formiraju spore, slično meningokima. Ćelijski zid ima vanjsku membranu, čiji su proteini podijeljeni u tri grupe prema svom funkcionalnom značaju. Gonokoke karakteriše prisustvo pilija, koji se međusobno razlikuju po svojim antigenskim svojstvima (16 antigenskih varijanti). Gonokoki se uzgajaju na hranljivim podlogama koje sadrže prirodne proteine ​​(krvni serum, ascitična tečnost). Bolje rastu na 3-5% CO2. Na ascitagarusu se formiraju prozirne kolonije sa glatkim ivicama. Od ugljikohidrata fermentira se samo glukoza, formiraju se katalaza i citokrom oksidaza - enzimi tipični za Neisseria.

Antigeni

Antigenska struktura gonokoka je promjenjiva. To je zbog prisustva brojnih antigenskih varijanti pilija koje nastaju tokom razvoja infekcije.

Patogenost i patogeneza

Gonokoki se vežu za cilindrični epitel uretre, vaginalni dio cerviksa, rektum, konjunktivu oka, kao i spermatozoide i protozoe (trihomonade, amebe). Adhezija nastaje zbog pila i proteina vanjske membrane ćelijskog zida. Karakteristična karakteristika gonokoka je njihova sposobnost da prodiru u leukocite i da se u njima razmnožavaju. Lipooligosaharidni dio ćelijskog zida ima toksično djelovanje. Kapsularni polisaharidi inhibiraju fagocitozu. Povezujući se s resicama cilindričnog epitela sluznice uretre, a kod žena, endocervikalnim kanalom, gonokoki prodiru u stanice uz sudjelovanje proteina vanjske membrane ćelijskog zida. To dovodi do razvoja akutnog uretritisa, cervicitisa i oštećenja grlića materice, privjesaka (cijev, jajnika) kod žena, sjemenih mjehurića i prostate kod muškaraca. Uz ekstragenitalnu lokalizaciju, gonokoki mogu oštetiti rektum i krajnike, a također mogu uzrokovati blenoreju (konjunktivitis) kod novorođenčadi. Infekcija se javlja tokom prolaska porođajnog kanala majke sa gonorejom.

Imunitet

Kod gonoreje se javlja humoralni imuni odgovor. Međutim, nastala antibakterijska antitijela nemaju zaštitna svojstva. U toku bolesti stvara se IgA, koji potiskuje vezivanje pilića patogena za ćelije sluzokože uretre. Međutim, oni nisu u stanju zaštititi sluznicu od naknadne infekcije drugim generacijama gonokoka, što je povezano s promjenom njihove antigenske strukture. To dovodi do ponovnih infekcija i recidiva, kao i do hronične bolesti.

Gonokokne infekcije

Uzročnik gonoreje i blenoreje N.gonorrhoeae (preliminarno klasifikovan kao gonococcus) pripada porodici Neisseriaceae, rodu Neisseria. U brisevima iz sekreta pacijenata gonokoki imaju oblik zrna kafe, gram-negativni su i nalaze se u parovima kako unutar leukocita (nepotpuna fagocitoza) tako i izvan ćelija. Po svojim morfološkim karakteristikama vrlo su slični meningokokama. Gonokoke karakterizira polimorfizam - postoje male i velike ćelije, rijetko štapićaste, vrlo su izbirljive u hranljivim medijima. Bolje rastu na podlogama koje sadrže krv, serum i ascitičnu tekućinu. Gonokoki sadrže proteinske i polisaharidne antigene, prema kojima se dijele na 16 serovara, ali se još ne određuju u rutinskim bakteriološkim laboratorijama. Za mikrobiološku dijagnostiku gonokoknih infekcija koriste se bakterioskopske, bakteriološke, serološke i alergijske metode.

Uzimanje materijala za istraživanje

Za dostojanstveno i kvalitetno obavljanje bakteriološke i bakterioskopske dijagnostike važno je pravilno uzimanje kliničkog materijala. U pravilu ga treba obaviti ljekar. Kod muškaraca se pregledaju sekreti mokraćne cijevi, parauretralni kanali, rektum, a po indikacijama i materijal iz orofarinksa, kao i sekret prostate nakon njegovog. masaža. Također možete ispitati sediment i "nitove" urina, ali gonokoki se u njima otkrivaju mnogo rjeđe. Prije uzimanja materijala iz uretre, pacijent ne smije mokriti 4-5 sati i ne koristiti antimikrobne lijekove i dezinficijense. Vanjski otvor mokraćne cijevi prvo se obriše sterilnim pamučnim štapićem navlaženim u 0,85% otopini natrijum hlorida, a zatim suvim štapićem. Razmazi se ne prave od stajnjaka, koji slobodno teče, već od materijala koji se uzima struganjem sa sluznice uretre bakteriološkom petljom ili posebnom Volkmannovom kašikom. Za manji iscjedak potrebno je obaviti preliminarnu masažu uretre. Kod žena se materijal uzima iz uretre, parauretralnih prolaza, cerviksa, rektuma i, ako je indicirano, iz orofarinksa. Prvo se vagina čisti od sekreta, masira mokraćovod, a materijal se odstranjuje struganjem bakteriološkom petljom ili Volkmannovom kašikom. Cerviks se prvo obriše sterilnim pamučnim štapićem kako bi se uklonio sluzni čep. Iscjedak iz cervikalnog kanala uzima se bakteriološkom petljom ili pincetom. Materijal iz distalnog rektuma uzima se pomoću Volkmannove kašike na slijepo, odnosno bez ikakve pripreme pacijenta, ili pomoću rekoskopa ili rektalnog spekuluma Kod orofaringealne gonoreje, sluz se uzima iz orofarinksa sterilnim vatama na posebnim držačima od čelične žice. Rijetko je gonoreja komplikovana gonosepsom, endokarditisom ili artritisom. Tada je materijal za juslidzhhenya krv ili sinovijalna tekućina. Uzimajući u obzir visoku osjetljivost gonokoka na temperaturne fluktuacije, materijali koji se proučavaju isporučuju se u laboratoriju u posebnim termozama ili vrećicama s grijačem.

Bakterioskopski pregled

Bakterioskopski pregled je najčešća, ali manje osjetljiva metoda laboratorijske dijagnostike gonoreje i blenoreje u odnosu na izolaciju stvarnih kultura. To se posebno odnosi na kronični tok bolesti, kada testni materijal sadrži malu količinu gonokoka. Međutim, uz pravilno prikupljanje materijala, ponovljene preglede pacijenata, primjenu metoda provokacije i kvalificiranu procjenu brisa, bakterioskopski pregled često omogućava brzo i ispravno dijagnosticiranje bolesti od dva tanka, ujednačena preparata brisa materijal koji se proučava. Jedan je obojen metilenskim plavim, drugi je obojen Gram metodom. U nedostatku metilen plavog, jedan razmaz se može bojiti 1% vodenim rastvorom kristalno ljubičaste ili 0,5% rastvorom brilijant zelene boje u trajanju od 1 minute. Zaključak o prisutnosti gonokoka donosi se na osnovu njihovih svojstava: gram-negativne boje, diplokokne strukture, oblika zrna kafe, položaja unutar leukocita Pod uticajem antibiotika i drugih hemoterapijskih lekova, kao i kod hronične gonoreje, morfologije. i boja gonokoka se može promijeniti. Pojedinačne ćelije stiču različit oblik i veličine (tzv. Asch forme). Osim toga, materijal za ispitivanje može sadržavati gram-negativne koke slične gonokokama iz roda Veillonella. Ovo u određenoj mjeri ograničava dijagnostičku vrijednost metode primarne mikroskopije. Najbolji i najpouzdaniji rezultati se dobijaju metodom imunofluorescencije. Tanke mrlje iz sekreta pacijenta fiksiraju se u plamenu plamenika. Antigonokokni serum označen fluorescein izotiocijanatom nanosi se na njih 1 sat na 35°C u vlažnoj komori. Nakon toga, brisevi se dva puta isperu puferskom otopinom, nanose se puferirani glicerolom i prekriju pokrovnim stakalcima. Kada gonokoki stupe u interakciju s obilježenim antitijelima, pod fluorescentnim mikroskopom vidljiv je karakterističan sjaj oko bakterijskih stanica.

Bakteriološka istraživanja

Indikacije za izolovanje čistih kultura gonokoka su ponovljeni negativni rezultati bakterioskopije, prisustvo mikroorganizama sumnjivih na gonokoke, ali nisu morfološki identifikovani, kao i za pouzdano utvrđivanje izlečenja bolesti. Veoma je važno odmah staviti useve u termostat. Ako je nemoguće izvršiti kulture na mjestu prikupljanja materijala, možete objesiti pamučni štapić u epruvetu sa Stewartovim transportnim medijem, čime se osigurava očuvanje održivosti gonokoka tijekom isporuke u laboratorij izneti prema standardnoj šemi u jednom od specijalnih hranljivih podloga u epruvetama ili Petrijevim posudama (CDS, Bailey, krvni ili serumski agar, suvi hranljivi medijum harkovskog preduzeća "Biolek" za proizvodnju bakterijskih i medicinskih preparata). Za dijagnostičku kultivaciju gonokoka u mnogim zemljama koristi se i “čokoladni” agar. Najbolji mediji su oni na bazi zečjeg mesa ili svježeg goveđeg srca. Dodavanje 20 jedinica/ml polimiksina i 2 μg/ml linkomicina značajno povećava učestalost inokulacije gonokoka, jer ovi lijekovi inhibiraju rast drugih bakterija. Prije sjetve sve podloge se zagrijavaju u termostatu 15-20 minuta. Posude i epruvete sa kulturama stavljaju se u eksikatore, gdje se stvara atmosfera od 20% CO2. Kolonije obično rastu u roku od 18-24 sata, ali je moguć i kasni rast. Zatim se usjevi drže u termostatu (u eksikatoru!) do 8 dana, svakodnevno provjeravaju izgled izrasline. konzistentnost. Prozirne su, poput kapi rose, gotovo bezbojne, mada se mogu javiti i bjelkaste varijante. Nastale kolonije se pregledavaju makroskopski i mikroskopski. U razmazima, gonokoki se nalaze u parovima, tetradama i grozdovima. Tipične kolonije su subkulturisane na serum agar kosim slojevima kako bi se izolovala čista kultura. Konačna identifikacija se provodi uzimajući u obzir morfološka, ​​kulturološka, ​​enzimska i antigenska svojstva. Biohemijski, gonokoki su malo aktivni. Na podlogama sirutke sa 1,5% različitih ugljikohidrata razgrađuju samo glukozu, ali ne i maltozu i saharozu. Oksidazna aktivnost izoliranih kultura utvrđuje se primjenom 1% otopine dimetilparafenilendiamina na kolonije (nakon mikroskopije). Kolonije pozitivne na oksidazu prvo postaju crvene, a kasnije crne. Diferencijacija gonokoka od drugih vrsta roda Neisseria je od posebne važnosti u dijagnozi orofaringealne gonoreje. Kao što je poznato, na sluznici krajnika, usta i nazofarinksa uvijek postoji veliki broj gram-negativnih Neisseria - predstavnika normalne ljudske mikroflore. Pouzdane metode za identifikaciju gonokoka su reakcije imunofluorescencije, lateksa i koaglutinacije, kao i određivanje enzimskih svojstava. Neophodno je izvršiti kvalitativno određivanje osjetljivosti ili rezistencije mikroorganizama na antibiotike metodom agar difuzije pomoću diskova kako bi se povećala učestalost nalaženja gonokoka u brisevima tokom primarne mikroskopije i pouzdanije izolacije čistih kultura. U slučajevima tromog, kroničnog tijeka bolesti, koriste se metode izazivanja gonoreje, odnosno umjetno pogoršanje patološkog procesa, zbog čega se u sekretima pojavljuje veći broj gonokoka. Glavne od ovih metoda su: a) hemijska - ukapavanje 0,5% rastvora srebrnog nitrata u mokraćnu cijev kod muškaraca, mazanje cervikalnog kanala sa 2-5% rastvorom srebrnog nitrata b) mehaničko - umetanje direktnog; bougie u uretru u trajanju od 10 minuta, ili prednja uretroskopija c) intramuskularna injekcija gonovaccine u količini od 500 miliona mikroba ili 200 MTD; genitalije sa induktotermnom strujom f) uzimanje mrlja tokom menstruacije lančana reakcija. Omogućuje vam identifikaciju patogena u slučajevima kronične gonoreje, kada bakterioskopski i bakteriološki pregled ne daju pozitivne rezultate.

Serološka dijagnoza

Serološka dijagnoza gonoreje se provodi relativno rijetko, uglavnom u kroničnom toku, kada bakterioskopske i bakteriološke studije ne daju pozitivne rezultate. IN savremenim uslovima provesti enzimski imunotest, RNGA i Bordet-Gengou reakcije (BRS). Antigeni za ove reakcije su: polivalentna gonokokna vakcina uništena toplinom, ultrazvučno inaktivirana vakcina, proteinske i polisaharidne frakcije gonokoka, kao i piridinski antigen. ELISA i RNGA su visoko specifične i pouzdane serološke reakcije. U poređenju sa prošlošću, RSK je donekle izgubila svoju ulogu. Nema praktičnu vrijednost u dijagnostici akutne gonoreje, jer se liječi prije stvaranja značajne količine antitijela. Općenito je neprikladan za utvrđivanje pouzdanosti lijeka. Bordet-Gengou reakcija je važna u serodijagnostici kronične gonoreje, posebno u njenim komplikovanim oblicima (gonosepsa, metritis, artritis, prostatitis, itd.) Dijagnostička vrijednost alergijskih testova je donekle obezvrijeđena činjenicom da su kod mnogih pozitivni godine nakon gonoreje. Da bi se postavili, intradermalno se ubrizgava 0,1 ml svježe vakcine protiv gonokoka (100 miliona mikrobnih ćelija u 1 ml). Nakon 24 sata uočava se hiperemija, ponekad sa otokom u centru.

Liječenje i prevencija

Za hemoterapiju gonoreje koriste se antibiotici: beta-laktami (penicilini, cefalosporini) i drugi antibiotici. Vakcinalna prevencija gonoreje se ne sprovodi zbog nedostatka efikasnih vakcina. Kako bi se spriječila blenoreja, svim novorođenčadima se daje otopina jednog od navedenih antibiotika ukapljena u konjuktivu oka.