Bộ thuốc thử “Môi trường dinh dưỡng để phân lập gonococci, khô” (thạch GNK) được thiết kế cho mục đích vi sinh. Nó được sử dụng để phân lập lậu cầu khi nghiên cứu vật liệu bị nhiễm bệnh, đồng thời là môi trường để nuôi cấy và lưu trữ lậu cầu trong công việc nghiên cứu.
Bộ thuốc thử có sẵn dưới dạng một bộ gồm hai thành phần đông khô:
- điều cơ bản về môi trường dinh dưỡng - đông khô từ thể tích 100 ml trong chai - 1 miếng;
- phụ gia vào nền môi trường dinh dưỡng - đông khô từ thể tích 24 ml trong chai - 1 chiếc.
hợp chất: cơ sở của môi trường dinh dưỡng - chiết xuất thịt thỏ, pepton enzyme khô cho mục đích vi khuẩn, natri clorua, chất tự phân của men làm bánh, axit orotic, thạch vi sinh. Chất phụ gia nền của môi trường dinh dưỡng - whey ngựa dạng lỏng thông thường cho môi trường dinh dưỡng vi khuẩn, men tự phân của thợ làm bánh, aminopeptide cho môi trường dinh dưỡng vi sinh.
Sự chuẩn bị: Thêm 100 ml nước tinh khiết vô trùng vào chai cùng với đáy môi trường dinh dưỡng và giữ trong (30±5) phút, sau đó cho vào nồi cách thủy sôi cho đến khi thạch tan chảy hoàn toàn, sau khi tan chảy thạch được giữ trong bình thủy tinh. tắm nước không quá 5 phút. Thêm 24 ml nước tinh khiết vô trùng vào chai có thêm môi trường dinh dưỡng và để trong (20±2) phút cho đến khi hòa tan hoàn toàn ở nhiệt độ 20-25°C. Chất phụ gia đã hòa tan được chuyển sang bazơ hòa tan được làm nguội đến nhiệt độ (50±2)°C. Môi trường được khuấy, 3 ml được đổ vào ống nghiệm vô trùng và cắt nhỏ. 0,5 ml dung dịch natri clorua 0,9% vô trùng là cho vào mỗi ống nghiệm để làm ẩm môi trường. Môi trường cũng có thể được đổ 10-15 ml vào đĩa Petri vô trùng. Các ống nghiệm hoặc đĩa chứa môi trường dinh dưỡng được đặt trong (24±1) giờ trong bộ điều nhiệt ở nhiệt độ (37±1)°C để kiểm soát độ vô trùng. Môi trường dinh dưỡng đã chuẩn bị được bảo quản ở nhiệt độ (6±2)°C trong tối đa 7 ngày.
Nguyên tắc hoạt động: bộ thuốc thử phải đảm bảo sự phát triển của từng chủng Neisseria gonorrhoeae "Loshakov" và Neisseria gonorrhoeae "Denisov" thử nghiệm khi cấy 0,5 ml huyền phù vi sinh vật pha loãng 10"5 sau 24 - 48 giờ ủ ở nhiệt độ ( 37 ± 1) °C ở dạng khuẩn lạc trong suốt hoặc mờ, không màu, có kích thước từ 0,5 đến 2 mm với các cạnh nhẵn.
Tiến hành phân tích: Kết quả cấy được ghi nhận sau 24, 48 và 72 giờ ủ ở nhiệt độ (37±1)°C. Khi cấy dịch tiết của cơ quan sinh dục - niệu dục của bệnh nhân lậu phải theo dõi sự phát triển của lậu cầu trên môi trường dinh dưỡng. quan sát sau 24-72 giờ. Nếu lậu cầu không phát triển, hãy bảo quản cây trồng trong tủ điều nhiệt tối đa 7 ngày.
Đóng gói: Hũ polyetylen 0,25 kg để pha chế 3,6 lít môi trường.
Thời hạn sử dụng - 1 năm.
Giá trên đã bao gồm VAT/1kg.
Hiệu quả của phương pháp nghiên cứu vi khuẩn học
phần lớn được quyết định bởi chất lượng của môi trường dinh dưỡng. TRONG
Ở nước ta có hai loại được thử nghiệm và sử dụng rộng rãi nhất
Môi trường dinh dưỡng: môi trường thạch cổ trướng và môi trường dinh dưỡng không cổ trướng.
Cơ sở của cả hai môi trường là thạch pentone thịt (MPA) từ thịt
thỏ hoặc tim bò tươi. Phương pháp chuẩn bị của nó
là như sau. Thịt thỏ không có mỡ và
gân, cho qua máy xay thịt hoặc cắt nhỏ bằng dao,
cân, chứa đầy thể tích gấp đôi nước máy và trong này
mẫu được để trong tủ lạnh ở 4°C trong một ngày để chiết xuất.
Sau đó khối lượng được đun nóng đến sôi, đun sôi trong 10 phút, để nguội và
lọc qua vải thưa. Thêm vào dịch lọc 2% agar-agar, 1%
pepton và natri clorua 0,5%, đun nóng cho đến khi thạch tan
và đặt pH=7,5-7,6 (kiềm hóa là 20%
dung dịch natri hydroxit). Đun sôi môi trường, lọc
qua màng lọc bông gòn, đổ vào chai vô trùng hoặc
bình và khử trùng trong nồi hấp trong 15-20 phút ở 0,5 atm
đồng hồ đo áp suất (112е).
Kỹ thuật chế biến MPA từ lòng bò tươi cũng giống như
chỉ nên đun sôi khối trái tim nghiền nát trong nước
tạo ra 20 phút thay vì 10.
Có thể chuẩn bị môi trường dinh dưỡng cơ bản mà không cần pepton.
Trong trường hợp này, họ sử dụng phương pháp trên để chuẩn bị MPA, nhưng
peptone được loại trừ khỏi thành phần của nó, thịt thỏ băm nhỏ được đun sôi
5 phút thay vì 10 và khử trùng môi trường trong nồi hấp trong 10
phút ở áp suất 0,8 atm trên đồng hồ đo áp suất (117®).
thạch cổ trướng
Dịch báng nên được lấy từ bệnh nhân có
cổ trướng do suy tim, và
được sản xuất qua trocar vào chai vô trùng và thêm 5%
cloroform để gây mê. Trong 10 ngày, chất lỏng được trộn với
cloroform bằng cách xoay chai, sau đó để ở
nhiệt độ phòng cho đến khi cloroform lắng hoàn toàn xuống đáy chai
và làm sạch chất lỏng. Sau này, nếu cần thiết, minh bạch
dịch cổ trướng được đổ vào bình vô trùng 50 ml có
nút bông và hàng ngày trong 3 ngày chúng được đặt trong
cách thủy ở nhiệt độ 56°C trong 1 giờ để làm bay hơi cloroform.
thông qua một nút bông. Sau khi kiểm tra dịch cổ trướng tìm
vô trùng nó có thể được sử dụng để làm giàu
Môi trường dinh dưỡng phân lập lậu cầu ở nồng độ 1/3 và 1/4
thể tích của môi trường được xác định bằng thực nghiệm.
Bí quyết nuôi cấy môi trường không có cổ trướng
1. MPA từ thịt thỏ hoặc lòng bò tươi
(pH=7,4-7,5) - 100 ml, casein thủy phân dùng tiêm
dinh dưỡng protein - 2 ml, men tự phân - 2 ml, váng sữa
máu gia súc - 20 ml (môi trường KDS-1).
2. MPA từ thịt thỏ hoặc lòng bò tươi
(pH=7,4-7,5) - 100 ml, dung dịch thủy phân máu 5% - 2 ml,
men autolysate - 2 ml, huyết thanh bò
gia súc - 20 ml (môi trường GDS-2).
3. MPA từ thịt thỏ hoặc lòng bò tươi
(pH=7,4-7,5) - 100 ml, môi trường 199 cho nuôi cấy mô không có
kháng sinh - 20 ml, men tự phân - 2 ml, huyết thanh
gia súc - 20 ml (trung bình 199-SDS).
4. MPA từ thịt thỏ hoặc lòng bò tươi
(pH=7,4-7,5) - 100 ml, lòng đỏ trứng gà tươi - 10 ml,
huyết thanh gia súc - 20 ml (môi trường JS).
Lòng đỏ trứng được lấy vô trùng từ trứng gà ăn kiêng
ngay trước khi chuẩn bị môi trường. Đối với điều này,
Sau khi được xử lý trước bằng cồn, vỏ được mở bằng dụng cụ vô trùng
nhíp và đổ lượng trứng vào phễu vô trùng. Sau đó
Sau khi lòng trắng chảy ra hết, lòng đỏ còn lại trong phễu được chuyển sang
hộp đựng vô trùng và pipet đo lường theo yêu cầu
sản xuất khối lượng trung bình dinh dưỡng của lòng đỏ.
Việc chuẩn bị chất tự phân của nấm men như sau.
Men làm bánh được nghiền nhỏ và cho vào chai lớn hơn
thể tích men lấy là 4 - 5 lần và để tự phân trong hai lần
ngày trong tủ sấy hoặc bộ điều nhiệt ở 60°C. Sau đó dày
khối màu nâu được pha loãng với ba thể tích nước máy ấm
nước, trộn đều và ly tâm hai lần trong 10 phút ở
1000 vòng/phút (cho đến khi chất lỏng trong). Chất nổi phía trên
chất lỏng được rút hết, thêm 0,5% natri clorua vào, điều chỉnh
pH đến 7,4-7,5 và hấp trong 30 phút ở 1 atm
đồng hồ đo áp suất (120°). Bảo quản thành từng gói nhỏ trong tủ lạnh
Chất tự phân của nấm men có thể được thay thế bằng dung dịch 1,5%
chiết xuất men thức ăn (EKD) với cùng lượng (2 ml) 1,5%
Dung dịch EKD được chuẩn bị trong phòng thí nghiệm từ EKD khô bằng cách hòa tan nó trong
nước cất vô trùng. Nấu theo cách này
dịch chiết lỏng được đổ vào các ống vô trùng và khử trùng trong
hấp ở áp suất 0,5 atm trên đồng hồ đo áp suất trong 20 phút.
Trong tất cả các môi trường dinh dưỡng trên, huyết thanh
gia súc có thể được thay thế bằng gia súc bản địa bình thường
huyết thanh cho môi trường nuôi cấy vi khuẩn,
là cùng một loại huyết thanh, nhưng có thêm chất bảo quản.
Chuẩn bị môi trường tăng sinh
MPA, đựng trong chai hoặc bình, tan chảy trong nước
tắm, làm nguội đến 56-58° và thêm các thành phần vào đó
tỷ lệ được chỉ định trước đó trong công thức nấu ăn. Làm giàu với MPA 3-3,5
ml được đổ vào các ống vô trùng, môi trường được cắt và làm ẩm
0,5 ml nước dùng pepton thịt vô trùng hoặc nước đẳng trương
dung dịch natri clorua sau khi nó cứng lại. Để kiểm tra
Để đảm bảo vô trùng, môi trường được đặt trong bộ điều nhiệt ở 35-37°C mỗi ngày.
Tất cả các dịch không có dịch báng ở trên, ngoại trừ dịch trứng, đều trong suốt,
Thật dễ dàng để phân biệt các khuẩn lạc vi sinh vật trên chúng. Thứ Tư,
được làm giàu bằng trứng, nó có màu đục, màu vàng, mọc trên
Các khuẩn lạc của nó, đặc biệt là gonococci, khó phân biệt được. Tuy nhiên, tăng trưởng
gonococcus có nhiều trên môi trường này và các khuẩn lạc của nó có thể dễ dàng bị
được phát hiện bằng cách xử lý sự tăng trưởng bằng dung dịch 1%
dimethylparaphenylenediamine hoặc thuốc thử oxidase khác,
khuẩn lạc lậu có màu gì đỏ, tốt
tương phản với nền màu vàng của môi trường. Sử dụng lòng đỏ
môi trường mà không xử lý sự phát triển của vi sinh vật bằng thuốc thử oxidase thì không
Chất lượng của mỗi loạt phim mới môi trường dinh dưỡng phòng thí nghiệm
sản xuất phải được kiểm tra bằng cách gieo hạt trên đó
vật liệu bệnh lý từ bệnh nhân bằng phương pháp soi vi khuẩn
gonococci đã được tìm thấy.
Thời hạn sử dụng của MPA trong tủ lạnh ở 4°C không được vượt quá 1
tháng, môi trường phong phú - 7 ngày.
Do thực tế là đối với môi trường trên, có thể có một khoảng thời gian ngắn
lưu trữ, một phương pháp sản xuất đã được phát triển
môi trường dinh dưỡng không có cổ trướng đông khô, dưới
tựa đề "Môi trường dinh dưỡng phân lập lậu cầu, khô"
Có sẵn trong hai chai: phần I (cơ sở trung bình) và phần II
(chất làm giàu). Chuẩn bị môi trường làm việc ở Phần I
bạn cần thêm 100 ml nước cất vô trùng và đun nóng
trong nồi cách thủy ở nhiệt độ 100° cho đến khi lượng chứa trong chai hòa tan hoàn toàn
(trong vòng 30 phút). Thêm thời gian để giữ môi trường trong nước
Không cần tắm vì điều này làm giảm chất lượng của nó. Phần II bao gồm
24 ml nước cất vô trùng (hòa tan chất tăng sinh
chất xảy ra ngay lập tức). Khi đó nếu đủ điều kiện
vô trùng, phần II được chuyển sang phần I, làm nguội đến 56°C,
trộn đều, đổ vào ống vô trùng, cắt nhỏ và
dưỡng ẩm như mô tả trước đó.
Môi trường khô được chế biến từ thịt thỏ hoặc lòng bò,
ngoài các chất tăng sinh nêu trong công thức 1 (môi trường KDS-1)
nó chứa axit orotic ở nồng độ 1 μg/ml. Thứ Tư
Chất lượng cao, thuận tiện cho việc sử dụng trong vi khuẩn học
phòng thí nghiệm, bởi vì Để biến môi trường khô ráo thành môi trường làm việc cần phải có
chỉ có nước cất vô trùng.
Sử dụng môi trường dinh dưỡng không có cổ chướng cùng với việc bổ sung
thuốc kháng sinh và axit orotic cho kết quả tốt Tại
chẩn đoán vi khuẩn, bao gồm cả ngoại di truyền
bệnh lậu: bệnh lậu ở amidan và hầu họng, trực tràng. Thuốc kháng sinh
được thêm vào để ngăn chặn sự phát triển của lậu cầu đi kèm
hệ vi khuẩn, làm tăng cường độ phát triển của lậu cầu,
tạo điều kiện thuận lợi cho việc phát hiện các khuẩn lạc đơn lẻ và phân lập trong môi trường thuần khiết
văn hoá. Thêm 20,0 U/ml polymyxin M sunfat và 6,2 U/ml
ristomycin sulfat; thay vì cái sau bạn có thể sử dụng
Lincomycin hydrochloride - 2 mcg/ml. Axit orotic được tiêm vào
thành phần của môi trường dinh dưỡng với lượng 1 μg/ml.
Để làm điều này, lấy mẫu axit orotic 1 mg (1000 μg) và
pha loãng trong 1,0 ml nước cất vô trùng (lấy
dung dịch làm việc chứa 1000 mcg có thể được bảo quản trong
tủ lạnh trong 10 ngày) và khử trùng trong nồi cách thủy 15
phút, sau đó lấy 0,1 ml dung dịch thu được cho vào
100 ml môi trường dinh dưỡng tăng cường. Môi trường có kháng sinh
phải được sử dụng đồng thời với môi trường không có kháng sinh
(một ống nghiệm chứa môi trường chứa kháng sinh, ống còn lại không chứa kháng sinh), bởi vì
mặc dù hiếm gặp nhưng có những chủng lậu cầu nhạy cảm với
kháng sinh nói trên.
Phương tiện lưu trữ (vận chuyển)
Thành phần môi trường bảo quản: 1) 1 lít nước cất,
không chứa clo, 30 g agar-agar; 2) 900 ml chưng cất
nước không có clo, 2 ml axit thioglycolic, 12 ml 1M
dung dịch natri hydroxit, 100 ml dung dịch natri 20%
photphat đơn thế, 20 ml dung dịch clorua 1%
canxi. Hỗn hợp cuối cùng (2) được thêm vào hỗn hợp mới chuẩn bị
thạch (1), chỉnh pH về 7,3-7,4, đổ 10 ml môi trường vào
ống nghiệm vô trùng, khử trùng bằng hơi nước chảy trong 1 giờ.
Tăm bông trên que hoặc que gỗ
thép không gỉ có đường kính khoảng 2 mm, gắn trên bông
nút chai, đun sôi trong 20 phút trong dung dịch đệm photphat, pH = 7,4 và
ngâm tẩm trong 24 giờ trong hỗn dịch nước 1% mỏng
than củi nghiền nát. Sau khi lau khô, tăm bông
chỉnh sửa, đưa vào ống nghiệm vi khuẩn
đường kính thích hợp (bằng đường kính của ống nghiệm với môi trường) và
Khử trùng trong nồi hấp trong 20 phút ở 1 atm (nhiệt độ
Để chuẩn bị dung dịch đệm photphat, chuẩn bị hai dung dịch: 1
dung dịch - 28,4 g natri hòa tan trong 1 lít nước cất
photphat bị thay thế (0,2M); Dung dịch 2 - trong 1 l
nước cất hòa tan 27,8 g axit citric(0,1M).
Trộn 181,7 ml dung dịch 1 và 18,3 ml dung dịch 2.
Sản xuất cây trồng sử dụng phương tiện bảo quản
được thực hiện như sau. Bác sĩ đang khám cho bệnh nhân
Lấy tampon ra khỏi ống nghiệm, nhét vào vị trí bệnh trên
vài giây để ngâm (bạn có thể làm vài giây)
chuyển động theo chiều kim đồng hồ và ngược chiều kim đồng hồ), loại bỏ nó mà không chạm vào
các vật xung quanh vào ống nghiệm có môi trường bảo quản. Trên cùng
Dùng nút bông đậy kín ống nghiệm bằng nút cao su. Trước khi gửi
vật liệu đến phòng thí nghiệm vi khuẩn, mẫu cấy được bảo quản ở 4°C
trong tủ lạnh thời hạn tối thiểu, nhưng không quá một ngày. Đồng thời
lấy vật liệu bệnh lý và làm vết bẩn cho
kiểm tra vi khuẩn, được gửi đến
phòng thí nghiệm cùng với văn hóa. Trong phòng thí nghiệm vi khuẩn
ngay sau khi nhận được mẫu bệnh phẩm có chứa chất bệnh lý
lấy ra khỏi môi trường bảo quản và dùng để gieo trên bề mặt
môi trường dinh dưỡng nghiêng trong ống nghiệm. Mỗi băng vệ sinh làm
cấy vào môi trường dinh dưỡng trong hai ống nghiệm. Gieo trên bề mặt
môi trường dinh dưỡng phải được tạo ra theo chuyển động ngoằn ngoèo
dọc theo bề mặt của môi trường, xoay miếng gạc. Nếu đường kính của ống nghiệm là
môi trường bảo quản và môi trường dinh dưỡng tương tự nhau, bạn có thể dùng tăm bông
sau khi cấy, để ống nghiệm thứ hai tiếp xúc với
môi trường dinh dưỡng. Cây trồng được đặt trong bộ điều nhiệt và phát triển ở nhiệt độ
36-37е trong bình hút ẩm. Xin lưu ý rằng khi sử dụng
môi trường bảo quản, sự phát triển của lậu cầu có thể xảy ra muộn hơn trong
cấy trực tiếp vật liệu bệnh lý vào chất dinh dưỡng
Làm việc với cây trồng
Việc nuôi cấy gonococci có thể được thực hiện trong ống nghiệm hoặc
Đĩa petri; phương pháp đầu tiên giúp tiết kiệm đáng kể
môi trường. Để tăng tỷ lệ tiêm chủng lậu cầu, tiêm
môi trường dinh dưỡng được đặt trong bộ điều nhiệt trong bình hút ẩm với 20%
phản ứng giữa axit sulfuric và natri bicarbonate: trong bình hút ẩm
một thể tích 5 lít được đặt thủy tinh với 50 ml axit sulfuric 10%, trong
Các phương pháp xét nghiệm được sử dụng rộng rãi trong chẩn đoán các bệnh lây truyền qua đường tình dục của hệ thống sinh dục: lậu, giang mai, trichomonas, v.v. Sự hiện diện của bệnh cần có các biện pháp để xác định nguyên nhân gây nhiễm trùng.
Môi trường dinh dưỡng SVG được thiết kế để phân lập và nuôi cấy gonococci khi nghiên cứu tài liệu từ bệnh nhân. Mỗi bộ được thiết kế để chuẩn bị 110 ml môi trường lậu cầu, sẵn sàng để sử dụng.
Đặt nội dung
Bộ dụng cụ lấy môi trường dinh dưỡng phải được bảo quản ở nhiệt độ 2 - 8°C không quá 12 tháng. Môi trường dinh dưỡng rắn có thể được bảo quản trong ống nghiệm hoặc đĩa Petri không quá 7 ngày. Bộ dụng cụ chuẩn bị môi trường dinh dưỡng bao gồm:
- cơ sở: agar, chiết xuất nấm men, pepton, tinh bột, muối;
- phụ gia chọn lọc: coenzym, lysate hồng cầu, thuốc chống nấm, kháng sinh, đường;
- hướng dẫn sử dụng bộ sản phẩm.
Phương pháp luận
Kỹ thuật này bao gồm một số giai đoạn, mỗi giai đoạn phải diễn ra theo những yêu cầu nhất định. Sau khi hoàn thành tất cả các giai đoạn chẩn đoán bệnh bằng phương pháp nuôi cấy mầm bệnh trên môi trường lậu cầu, kết quả được ghi nhận sau 24 giờ, 48 giờ và 72 giờ. Trong bệnh lậu cấp tính, sự phát triển của lậu cầu được quan sát thấy trong ngày đầu tiên, trong bệnh lậu mãn tính - lên đến 72 giờ.
Việc chuẩn bị dung dịch môi trường để chẩn đoán nuôi cấy được thực hiện bằng cách đổ môi trường vào thùng chứa nước cất (100 ml) để trương nở tiếp theo. Huyền phù thu được được đặt vào nồi cách thủy và khuấy định kỳ cho đến khi bazơ hòa tan hoàn toàn, sau đó đun sôi dung dịch trong 2 phút. Dung dịch phụ gia chọn lọc được chuẩn bị bằng cách hòa tan nó trong nước cất (10 ml) và khuấy.
Môi trường dinh dưỡng làm sẵn được hình thành bằng cách thêm dung dịch phụ gia chọn lọc vào dung dịch bazơ. Môi trường thu được được đổ vào các đĩa Petri vô trùng. Trước khi tiến hành nghiên cứu, môi trường lậu cầu phải được giữ trong một giờ ở nhiệt độ 37°C. Sau đó vật liệu được cấy theo lệnh của Bộ Y tế “Về việc thống nhất các phương pháp nghiên cứu vi sinh (vi khuẩn) dùng trong phòng thí nghiệm chẩn đoán lâm sàng của các cơ sở y tế.”
Thạch này có bổ sung máu, huyết sắc tố hoặc các chất phụ gia khác được khuyên dùng để phân lập chọn lọc lậu cầu.
Hợp chất**:
** Thành phần đã được kiểm định và điều chỉnh đáp ứng các thông số yêu cầu
Sự chuẩn bị:
Trộn 7,2 g bột trong 100 ml nước cất để chuẩn bị môi trường nồng độ gấp đôi. Đun sôi để hòa tan hoàn toàn các hạt. Khử trùng bằng nồi hấp ở áp suất 1,1 atm (121°C) trong 15 phút. Làm nguội đến 50°C và thêm 100 ml dung dịch hemoglobin vô trùng 2% (FD022) và chất bổ sung GC (FD021) đã được chuẩn bị riêng một cách vô trùng. Trộn kỹ và đổ vào đĩa Petri. Để mang lại các đặc tính chọn lọc, kháng sinh có trong các chất phụ gia sau có thể được thêm vào môi trường: VNC (FD023), VCNT (FD024), Linco T (FD026), Vanco (FD028).
Để chuẩn bị thạch sôcôla, chuẩn bị môi trường có nồng độ bình thường bằng cách khuấy 3,6 g bột trong 100 ml nước cất. Khử trùng, thêm tối đa 5% (v/v) máu đã khử fibrin vô trùng và làm ấm môi trường ở 80°C trong 10 phút.
Nguyên tắc và đánh giá kết quả:
Thạch này có bổ sung máu hoặc huyết sắc tố và các chất phụ gia khác được khuyên dùng để phân lập và nuôi cấy có chọn lọc các vi sinh vật khó tính như vi khuẩn gonococci và Haemophilusenzae. Johnston đã phát triển thạch sôcôla có thể đạt được sự tăng trưởng trong vòng 24 giờ Neisseria gonorrhoeae(1). Sau đó, các tác giả khác (2) đã cải tiến môi trường bằng cách đưa hemoglobin vào thành phần của nó.
Agar chứa pepton đặc biệt - nguồn dinh dưỡng cho vi sinh vật. Tinh bột giúp trung hòa các chất độc hại do Neisseria tạo ra và phốt phát chống lại sự thay đổi độ pH do hình thành các amin, điều này cũng có thể ảnh hưởng đến sự phát triển và khả năng tồn tại của vi sinh vật. Hemoglobin đóng vai trò là nguồn cung cấp yếu tố X cho vi khuẩn ưa chảy máu. Một chất phụ gia khác làm giàu môi trường với yếu tố V (NAD, niconinamide adenine dinucleotide), cần thiết cho Haemophilusenzae, cũng như các axit amin, vitamin, ion sắt, v.v., kích thích sự phát triển của neisseria gây bệnh.
Không sử dụng tăm bông để thu thập tài liệu. Việc gieo hạt được thực hiện ngay sau khi thu thập nguyên liệu. Nó phải được thực hiện để có những vùng tăng trưởng dày đặc và thưa thớt. Quá trình cấy được ủ ở 37°C trong môi trường có 5-10% carbon dioxide và độ ẩm 70%. Tất cả các khuẩn lạc nghi ngờ phải được kiểm tra bằng xét nghiệm sinh hóa và/hoặc huyết thanh học.
Kiểm soát chất lượng:
Xuất hiện bột:
Bột màu vàng nhạt chảy tự do đồng nhất.
Mật độ của môi trường đã hoàn thành:
Một môi trường được hình thành có mật độ tương ứng với gel agar 1,0%.
Màu sắc và độ trong suốt của môi trường đã hoàn thành:
Nền của môi trường có màu vàng nhạt, trong suốt hoặc hơi trắng đục. Sau khi thêm huyết sắc tố, môi trường sẽ có màu nâu sô cô la và đục nếu gel hình thành trong đĩa Petri.
Độ axit của môi trường:
Ở 25°C, dung dịch nước (3,6% w/v) có độ pH là 7,2 ± 0,2.
Tài sản văn hóa:
Đặc điểm tăng trưởng của chủng đối chứng sau 40-48 giờ ở 35-37°C trên thạch sôcôla được chuẩn bị trên cơ sở này, trong môi trường có 5-10% carbon dioxide và độ ẩm 70%.
